当归多糖对人成骨细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:本课题通过观察当归多糖对人成骨细胞增殖及凋亡的影响,进一步研究它对细胞周期和相关基因(CyclinDl、Bcl-2、Bax)表达的作用,从而探讨出当归多糖治疗骨质疏松症的作用及可能机制。方法:(1)将体外培养人成骨细胞系分为对照组及实验组,实验组加入不同终浓度的当归多糖(0.25mg/ml,0.5mg/ml,lmg/ml,10mg/ml)培养,两组分别培养72h,用MTS法检测不同浓度的当归多糖对人成骨细胞细胞活性的影响;(2)将体外培养的人成骨细胞系分为对照组和当归多糖组(终浓度为0.5mg/ml),共培养5天;用MTS法检测当归多糖对人成骨细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测当归多糖对人成骨细胞细胞周期和凋亡的影响,最后运用q-PCR和Western blot技术检测当归多糖对CyclinD、Bcl-2及Bax表达的影响。结果:(1)在终浓度0.25mg/ml到1mg/ml之间的当归多糖对于人成骨细胞增殖起促进作用,以0.5mg/ml浓度组效应最为显著;但是10mg/ml终浓度下的当归多糖具有细胞毒性,抑制其增殖。(2)当归多糖(终浓度为0.5mg/ml)能够促进人成骨细胞增殖,并且效应呈时间依赖性,以第五天效应最为明显(p<0.01)。(3)当归多糖(终浓度为0.5mg/ml)干预人成骨细胞5天后,运用流式细胞仪检测其细胞周期分布比例,结果表明:与对照组S期细胞比例(27.70±0.6658)%相比,当归多糖组S期细胞比例为(38.86±0.9557)%,差异具有统计学意义(p<0.05)。(4)当归多糖(终浓度为0.5mg/ml)干预人成骨细胞5天后,运用流式细胞仪检测其细胞凋亡比例,结果表明:对照组的凋亡细胞比例为(10.49±1.011)%,而当归多糖组的凋亡细胞比例为(6.233±1.621)%,差异没有统计学意义(p>0.05)。(5)当归多糖(终浓度为0.5mg/ml)干预人成骨细胞5天后,采用q-PCR和Western blot检测CyclinD1、Bcl-2及Bax的表达情况,结果发现:相对于对照组,当归多糖组CyclinD1的表达显著上调(p<0.05),然而Bcl-2和Bax的表达无明显变化(P>0.05)。结论:一定浓度范围的当归多糖能够促进体外人成骨细胞增殖,可能与促进CyclinD1表达来进一步使得细胞向S期分布这一机制相关,这也为其治疗骨质疏松症提供理论依据。