背景:类风湿关节炎（RA）是一种病因不明的自身免疫性疾病,遗传、免疫分子调节在发病机制上起着主要作用。研究认为具有特定的HLA抗原者（如HLA-DR4）,当受到外界刺激或发生自身改变时,HLA的抗原决定簇发生了改变,借助共同表位和基因剂量效应,使具有HLA的有核细胞成为免疫活化的靶子,产生T细胞激活及一系列免疫介质如细胞因子的释放,导致RA发生。本研究试图进一步探索HLA-DR4表型与细胞因子肿瘤坏死因子（TNF-α）及其受体（TNFRII）的单核甘酸多态性（SNP）的相互作用在RA的发病中的影响。
目的:通过对RA患者HLA-DR4表型和TNFα-308、TNFRⅡ+196的多态性之间相互作用的研究,探讨基因对RA患病风险、基因对相应的细胞因子浓度和临床病情指标的影响,从而进一步探索3个基因在RA发病中的作用。
方法:确定112例RA患者和129例健康对照者为研究对象,首先抽提外周血白细胞的基因组DNA,然后用PCR-SSP检测HLA-DR4表型和PCR-RFLP检测TNFα的-308位点和TNFRⅡ的+196位点的多态性,采用ELISA检测外周血清TNF-α、sTNFRⅡ浓度,最后收集临床病情指标资料（包括性别、年龄、病程、休息痛VAS评分、压痛关节数、肿胀关节数、握力、晨僵时间、ESR、CRP、RF、关节功能、x线分期）进行分析。
结果:
（1） HLA-DR4表型在RA患者组（50%）与健康者组（26.36%）阳性率的差异有明显的统计学意义（P=0.000）,HLA-DR4（+）使得患者发生RA的风险较健康者升高了2.794倍（95%CI:1.630-4.790）,性别的分层分析发现HLA-DR4（+）使得女性患者发生RA的风险升高了3.556倍（95%CI:1.811-6.979）。
（2） RA患者组与健康者组的TNFα-308等位基因型AA/GA/GG（0/8/104 vs 2/23/104,P=0.010）、少见等位基因型（AA+GA）/GG（8/104vs 25/104,P=0.006）和等位基因A/G（8/216 vs 27/231,P=0.004）构成比的差异有明显的统计学意义,TNFα-308少见等位基因型（AA+GA）和等位基因A使得患者发生RA的风险性较健康者升高3.125倍（95%CI:1.347-7.248）和3.156倍（95%CI:1.403-7.097）。性别的分层分析发现RA男患者组与男健康者组的TNFα-308等位基因型AA/GA/GG（0/2/34 vs 1/12/32,P=0.015）、少见等位基因型（AA+GA）/GG（2/34 vs13/32,P=0.007）和等位基因A/G（2/70 vs 14/76,P=0.007）构成比的差异有明显的统计学意义,TNFα-308少见等位基因型（AA+GA）和等位基因A使得男性发生RA的风险升高了6.906倍（95%CI:1.444-33.031）和6.447倍（95%CI:1.415-29.383）。
（3）RA患者组与健康者组的TNFRⅡ+196等位基因型GG/TG/TT（5/62/45 vs 9/56/64）、少见等位基因型（GG+TG）/TT（67/45 vs 65/64）、等位基因G/T（72/152 vs 74/184）构成比的差异没有明显的统计学意义,性别的分层分析发现等位基因型GG/TG/TT在女患者与女健康者之间的差异（3/49/24 vs 8/28/48,P=0.000）具有明显的统计学意义;少见等位基因型（GG+TG）/TT在女性患者与女健康者（52/24 vs 36/48,P=0.001）、男性患者与男健康者（15/21 vs 29/16,P=0.041）之间的差异具有明显的统计学意义,使得女性发生RA的风险升高2.889倍（95%CI:1.510-5.526）,男性发生RA的风险降低到0.394倍（95%CI:0.160-0.970）;而等位基因G/T的性别分层差异没有统计学意义。
（4）HLA-DR4、TNFα-308组成的5种组合基因型中,HLADR4（+）TNFα-308（GG）基因型使得患者发生RA的风险较HLADDR4（-）TNFα-308（GG）基因型增高2.931倍（95%CI:1.642-5.233）。
（5）HLA-DR4、TNFRⅡ+196组成的6种组合基因型中,HLA-DR4（+）TNFRⅡ+196（TT）基因型与HLA-DR4（+）TNFRⅡ+196（TG）基因型使得患者发生RA的风险较HLA-DR4（-）TNFRⅡ+196（TT）基因型分别增高2.476倍（95%CI:1.120-5.473）和6.136倍（95%CI:2.548-14.775）,HLA-DR4（+）TNFRRⅡ+196（TG）基因型使得患者发生RA的风险较HLA-DR4（-）TNFRⅡ+196（TG）基因型增高4.313倍（95%CI:1.851-10.050）。
（6） TNFα-308、TNFRⅡ+196组成的7种组合基因型中,TNFα-308（GA）TNFRⅡ+196（TT）基因型和TNFα-308（GA）TNFRⅡ+196（TG）基因型使得患者发生RA的风险较TNFα-308（GG）TNFRⅡ+196（TG）基因型分别降低到0.212倍（95%CI:0.056-0.804）和0.282倍（95%CI:0.084-0.945）。
（7） HLA-DR4、TNFα-308、TNFRⅡ+196组成的11种组合基因型中,HLA-DR4（+）TNFα-308（GG）TNFRⅡ+196（TT）基因型和HLA-DR4（+）TNFα-308（GG）TNFRⅡ+1 96（TG）基因型较HLA-DR4（-）TNFα-308（GG）TNFRⅡ+196（TT）基因型使患者发生RA的风险升高2.64倍（95%CI:1.124-6.202）和5.8倍（95%CI:2.297-14.646）;HLA-DR4（+）TNFα-308（GG）TNFRⅡ+196（TG）基因型较HLA-DR4（-）TNFα-308（GG）TNFRⅡ+196（TG）基因型使得患者发生RA的风险性升高了4倍（95%CI:1.637-9.775）。
（8） RA患者组与健康者组的TNF-α浓度（pg/ml）的差别（34.56±21.04 vs 20.63±15.46,P=0.000）具有统计学意义。特定组合基因型的RA患者与健康者组的血清TNF-α浓度差异具有统计学意义。析因设计的方差分析发现TNFα-308基因型*TNFRⅡ+196基因型（P=0.037）、HLA-DR4表型*TNFα-308基因型*TNFRⅡ+196基因型（P=0.009）以及组别（P=0.000）、组别*HLA-DR4表型*TNFα-308基因型（P=0.001）的交互作用对TNF-α浓度的影响具有统计学意义。
（9）RA患者组与健康者组之间的sTNFRⅡ浓度（ng/ml）的差别（8.544±6.29 vs 5.48±4.41,P=0.000）具有统计学意义。特定组合基因型的RA患者与健康者组的血清sTNFRⅡ浓度差异具有统计学意义。析因设计的方差分析发现组别（P=0.000）、组别*性别*HLA-DR4表型（P=0.038）、组别*TNFa-308基因型（P=0.025）、组别*TNFα-308基因型*TNFRⅡ+196基因型（P=0.037）的交互作用对sTNFRⅡ浓度的影响具有统计学意义。
（10）单一基因型对于RA病情的影响:HLA-DR4（+）与HLA-DR4（-）患者比较,发病年龄（岁）提早（42.59±14.07 vs 47.36±10.89,P=0.047）,RF浓度（IU/mL）较高（471.32±435.22 vs 308.13±331.34,P=0.028）。TNFα-308的2种基因型GA/GG的患者比较没有发现有统计学意义的差异。TNFRⅡ+196的3种基因型GG/TG/TT的RA患者比较,其性别比（男/女）构成的差异（2/3 vs 13/49 vs 21/24,P=0.018）和RF浓度（IU/mL）的差异（917.00±674.77 vs 353.58±362.85 vs 380.93±365.39,P=0.008）有统计学意义。
（11）组合基因型对RA病情的影响:HLA-DR4与TNFα-308的组合基因型中,HLA-DR4（+）TNFα-308（GG）基因型与HLA-DR4（-）TNFα-308（GG）基因型之间相比在发病年龄（岁）的差异（42.35±14.27vs 47.71±10.95,P=0.033）有统计学意义;而TNFRⅡ+196与其它2个基因的两两组合的基因型和3个基因组合的基因型,其间的比较只有性别构成差异的统计学意义最终保留下来。析因设计资的方差分析,发现HLA-DR4表型（P=0.013）、TNFRⅡ+196基因型（P=0.005）、性别*TNFRⅡ+196基因型（P=0.043）的交互作用对RF滴度的影响具有统计学意义。
结论:
（1） HLA-DR4表型（+）提高了RA患者,尤其是RA女性患者的患病风险。
（2） TNF-α基因-308位点的多态性提高了RA患者、尤其是RA男性患者的患病风险。
（3） TNFRⅡ基因+196位点的多态性与RA患者患病风险之间的关系比较复杂。
（4）特定的HLA-DR4、TNFα-308、TNFRⅡ+196组合基因型改变了RA发生的风险:TNFα-308（GG）轻微升高、TNFRⅡ+196（TT）轻微降低和TNFRⅡ+196（TG）显著升高基于HLADR4基础上的RA患病风险。
（5）血清TNF-α水平的差异与基因、疾病、疾病和基因二者之间的交互作用有关,而sTNFRⅡ水平的差异与疾病、疾病和性别和基因三者之间的交互作用有关。
（6）单一基因和组合基因型对于RA病情的影响仅体现在某些方面,如发病年龄、性别比构成及RF浓度的高低,而多因素的共同作用对RF滴度的差异有影响。
