油茶皂苷元的结构修饰及其抗神经退化活性研究

油茶皂苷是存在于油茶籽中一种主要的五环三萜化合物,由茶皂苷元、糖体和有机酸三部分组成,其主要的活性部位在茶皂苷元。茶皂苷具有显著的抗氧化作用、抗炎作用、镇痛作用、类激素作用、免疫调节作用和抗肿瘤作用。由于茶皂苷具有多靶点作用,且茶皂苷元经分离后,对大脑中枢的抗炎镇痛活性有明显增强,因此可以作为抗神经退化的前体药物。本文对茶皂苷元进行了结构修饰和抗神经退化活性研究,试图发现新型的抗神经退行性疾病的药物。本实验以粗品油茶皂苷为原料,分离纯化并水解得茶皂苷元,采用胺化修饰和金属配位两种方法指导合成不同的茶皂苷元衍生物,最后对茶皂苷元衍生物进行抗神经退化活性研究,其主要研究方法和结果如下：(1)粗品茶皂苷分别过超滤膜、反渗透膜、大孔吸附树脂进行纯化,纯化的茶皂苷采用香草醛-浓硫酸比色法对其含量进行测定,得纯度为95.02%。茶皂苷分别经过碱水解、酸水解、纯化得茶皂苷元,并通过紫外光谱、红外光谱、核磁氢谱分析确定结构。(2)本实验应用Discovery Studio 2.5分子对接软件对茶皂苷元的结构进行改造并与多巴胺D3受体蛋白进行模拟对接。从对接成功的结构中选择长链羟基被氨基取代的结构用于指导合成,采用非均相镍催化醇和氨气合成伯胺的方法合成该结构分子,并通过高效液相色谱法测得合成产物的纯度为93.29%。纯化的胺化产物通过紫外光谱、红外光谱、核磁氢谱、有机元素分析方法进行表征,得胺化产物的结构式为C30H55N5,即茶皂苷元结构上的羟基(包括醛基)均被氨基取代。本实验进一步采用单因素分析法对茶皂苷元的浓度、反应温度、反应时间三个因素对反应产率的影响进行考察,得最佳反应条件：茶皂苷元的浓度为12.5 mg/mL,反应温度为200℃,反应时间为32h。(3)本文通过络合反应得到茶皂苷元的铁、锌、锰、铜四种金属配合物,并对合成的配合物分别通过紫外光谱、红外光谱、元素分析和金属含量测定、热重分析方法进行表征,结果得四种金属与配体均有络合,但铜和锰与配体的络合能力弱,结构不稳定,而锌和铁的络合能力强,得锌和铁配合物的分子式分别为：Zn(C30H47O5)3·H2O, Fe(C30H47O5)4·2H2O。(4)本实验采用马尔文纳米粒度仪和扫描电镜测得各衍生物的粒径均在100 nm以内,表现出良好的纳米性质,并通过对DPPH自由基的清除作用测得茶皂苷元及其衍生物均具有一定的体外抗氧化活性。本实验采用鱼藤酮所致小鼠海马组织损伤和多巴胺能神经元损伤,对茶皂苷元及其衍生物的作用进行研究。结果发现,茶皂苷元及其衍生物具有提高脑内组织抗氧化能力,减轻海马损伤,减少鱼藤酮所致DA损失。其作用机制可能是通过增加脑组织中抗氧化酶的含量,提高抗氧化活性,保护多巴胺神经元,对抗鱼藤酮所致DA的降低。胺化产物能减少DA的损失,还可能是由于与多巴胺受体激动作用,使得DA的代谢降解缓慢。