中药大黄抗内毒素药效物质基础及其血清药化学研究

中药大黄具有攻积导滞、清热泻火解毒等的功效,现代研究表明大黄治疗急性感染性疾病与其抗内毒素作用密切相关。在国家自然基金(批准号:30371756)的资助下,前期工作对大黄药材不同溶剂提取部位进行了药效筛选,结果发现蒽醌类化合物可能是大黄抗内毒素的有效组分。据此,本文进一步开展大黄抗内毒素有效组分的确定工作,以及有效组分的体内外化学特征分析,进一步探索大黄抗内毒素作用的药效物质基础。 1大黄抗内毒素有效组分的确定 应用溶剂提取法,分别对大黄结合型蒽醌和游离型蒽醌进行提取,并用大孔吸附树脂进行精制。制备得到的大黄结合型蒽醌提取物呈棕褐色粉末,大黄游离型蒽醌提取物呈棕黄色粉末。 采用分光光度法测定,大黄游离型蒽醌提取物(干燥品)以大黄素计,含总游离蒽醌58.85%;大黄结合型蒽醌提取物(干燥品)以大黄素单氧葡萄糖苷计,含总结合蒽醌51.70%。采用HPLC法,对大黄游离型蒽醌提取物和结合型蒽醌提取物水解前后进行了含量测定:测定指标为:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。 通过对内毒素致热家兔药效学实验,结果表明大黄游离型蒽醌提取物能够显著抑制内毒素致热家兔的两个发热高峰,而大黄游离型蒽醌提取物和大黄结合型蒽醌提取物均可以显著降低内毒素致热家兔血浆中内毒素的含量。 2大黄抗内毒素有效组分体外化学成分分析 采用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、重结晶等方法,对大黄正丁醇部位进行化学成分分离,除已有对照品的5个游离型葸醌外,从中分离得到8个化合物,采用UV、IR和NMR等手段鉴定了其中的5个化合物,分别为白藜芦醇、10,10-双6-羟基芦荟大黄素、4-(4′-羟基苯基)-2-丁酮-4′-O-β-D-(6″-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。 采用HPLC法,对大黄抗内毒素有效组分进行了指纹图谱初步分析,对其中的主要色谱峰进行归属,对大黄游离型蒽醌与结合型蒽醌提取物中所含化合物的化学特征进行了表征。 3大黄抗内毒素有效组分血清药化学研究 在体外指纹图谱同样色谱条件下,考察了大鼠灌胃大黄煎剂后血清中的化学成分;并与体外指纹图谱和已知对照品比对,分析了血清中化合物的来源,发现了5个代谢成分。 同法进行了大鼠分别灌胃大黄游离型蒽醌提取物和大黄结合型蒽醌提取物血清样品的化学成分分析,结果发现,存在于两个大鼠血清样品中化学成分是相似的,其中以游离型蒽醌化合物为主。