延胡索中生物碱类化合物的分离纯化及指纹图谱研究

本文以延胡索中生物碱类化合物为模式物,针对延胡索有效成分延胡索乙素传统生产工艺存在收率低、能耗高、耗时长、质量控制不稳定等问题,提出了提取—层析分离—高速逆流色谱快速纯化的延胡索乙素生产新工艺,并建立了基于数字化指纹图谱技术评价元胡止痛片的质量控制标准,要点如下: 在提取过程中,考察了提取工艺的主要参数,建立了适合不同分离纯化要求的延胡索提取工艺;在层析分离过程中,通过静态吸附和动态吸附相关参数对离子交换树脂进行优化,筛选出适合于延胡索分离的D152树脂。在优化的条件下,延胡索乙素的纯度从原料中峰面积百分比的4.11%提高到21.13%,收率为65.50%,相比于液液萃取及沉淀法分离延胡索乙素,离子交换树脂分离法具有收率高、处理能力大、操作简便和再生利用容易等优点;粗制样品通过高速逆流色谱一步分离获得高纯度延胡索乙素。由于在高速逆流色谱中溶剂体系的筛选占了90%以上的工作量,本文提出了一种新概念,建立了新方法(平均极性P′),这种新的溶剂体系筛选方法,可以一步从上百种溶剂体系中中筛选到几种合适的溶剂体系,极大地缩短了工作量,提高了工作效率,有利于高速逆流技术的推广。上机实验对新方法进行了验证,采用正已烷:乙酸乙酯:甲醇:水（4-6-5-5）一步分离成功延胡索乙素,纯度为92.7%,回收率达到95.1%。 根据美国FDA、WHO、欧洲药典以及国家药品监督管理局的要求,草药制剂生产商提供原料、半成品及成品的指纹图谱以保证其品种的真实性和批次间质量的稳定性。本文建立了一种适合于含生物碱化合物指纹图谱分析的流动相,并对原理进行了讨论。通过改变流动相的梯度建立了两种以生物碱类化合物为指标物的中成药高效液相指纹图谱,进一步以相对保留时间作为定性依据,相对峰面积作为定量依据,以及特征指纹总差异率和重叠率等构建了高效液相色谱数字化指纹谱,消除了操作过程中各种操作因素的影响,有效地降低了色谱保留值的波动性,使不同样品之间可以进行量化比较;绘制了特征指纹曲线,直观表现了不同样品之间的近似程度;以图像式指纹图谱和数字化指纹谱评价了不同厂家的元胡止痛片和黄连上清丸,对各样的质量差异进行了定量的鉴别,对产生差异的原因也作了初步剖析。不同厂家和批次药品的质量进行对比,其差异分明,可供应用时参考。该分离纯化及质量控制方法可推广应用于其他中草药及天然产物的研究。