菊花多糖提取分离及初步纯化研究

菊花为菊科的头状花序，是常用中草药，具有清热解毒，清肝明目，降血压之功效。菊花多糖是其主要生物活性成分之一，有增强免疫力，防衰老等多方面的药理作用。 以黄山贡菊(C．Morifolium Rama Huang Shan．)为原料，主要研究了多糖含量测定方法的确立、多糖成分的提取工艺、分离纯化及其分子量。 以葡萄糖为对照品，对测定菊花多糖含量的苯酚-硫酸法进行了改进。结果表明，5％苯酚和浓硫酸的体积比为1∶5，硫酸加入量与总体积比为5∶8，沸水浴恒温15min，冷却放置30min后在490nm处检测多糖含量，其显色稳定，重现性好，准确度较高，用此法测得多糖含量为9.46％。 分别研究了浸提温度、醇沉终浓度、料液比和浸提时间等因素对多糖提取得率的影响。在此基础上进行正交实验，得到菊花粗多糖提取的最优工艺：提取温度95℃、提取时间3h、液固比25∶1醇沉终浓度80％，pH7.0和一次浸提，其得率为18.54％。微波助提可显著提高多糖提取效率，多糖得率较直接水提增加了13.3％。 研究了Sevag法、三氯乙酸法、醇析+Sevag法对菊花多糖脱蛋白效果的影响。结果表明，Sevag法、三氯乙酸法、醇析+Sevag法的脱蛋白率分别为40％、66％、39％，多糖保留率分别为70％、54％和64％。Sevag法较适合于菊花多糖的脱蛋白。 采用阴离子交换柱DEAE-52对菊花多糖进行初步分离，结果表明粗多糖存在两个组分，即CPS-Ⅰ、CPS-Ⅱ。采用Sephadex G-75对CPS-Ⅰ、CPS-Ⅱ进一步纯化，结果均得到单一、对称的洗脱曲线。紫外扫描结果表明多糖组分CPS-Ⅰ、CPS-Ⅱ在小于200nm处均有多糖吸收峰。采用HPLC法分析多糖组分的纯度和测定分子量，结果表明组分CPS-Ⅰ、CPS-Ⅱ的纯度均达到99％，分子量分别为13427、5268。