西黄丸调节MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路减少4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤微环境Treg细胞数量的抗肿瘤作用研究

目的:检测MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路的表达,研究西黄丸降低4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤微环境中调节性T(Regulatory T,Treg)细胞数量机制,阐明西黄丸抗肿瘤作用途径。方法:采用4T1乳腺癌细胞系建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型,分组为阴性对照组(等体积蒸馏水)和西黄丸低、中、高剂量组(0.39、0.78、1.95 g/kg),连续灌胃给药14 d,剥离肿瘤组织、称重、切片、匀浆。免疫磁珠分选肿瘤微环境中Treg细胞;免疫组化(IHC)和流式细胞术(FCM)检测肿瘤微环境中Treg细胞数量;TUNEL染色检测Treg细胞凋亡情况;Real-time PCR检测Treg细胞MEKK1、SEK1、JNK1和AP-1 mRNA表达;免疫荧光染色和Western Blot检测Treg细胞MEKK1、SEK1、JNK1和AP-1蛋白表达。结果:与阴性对照组比较,西黄丸中、高剂量组瘤重明显下降;IHC和FCM结果显示肿瘤微环境中Treg细胞数量随西黄丸剂量增高而降低;TUNEL染色结果显示Treg细胞凋亡数量随西黄丸剂量的升高而升高;Real-time PCR结果显示Treg细胞MEKK1、SEK1、JNK1和AP-1mRNA表达水平随西黄丸剂量的升高而增加;IF和Western Blot结果显示Treg细胞MEKK1、SEK1、JNK1和AP-1蛋白表达水平随西黄丸剂量的升高而增加。结论:西黄丸可能通过促进肿瘤微环境中Treg细胞凋亡从而降低肿瘤微环境中Treg细胞数量,解除机体免疫抑制,恢复机体抗肿瘤免疫功能,进而抑制4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长;其机制可能与西黄丸上调肿瘤微环境中Treg细胞MEKK1、SEK1、JNK1及AP-1 mRNA和蛋白表达有关。