厚朴酚的免疫抗炎作用及其对相关信号转导通路的调控

厚朴酚是一种联苯酚类化合物,是中国传统中药厚朴的主要活性成分,既往研究表明厚朴酚具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗哮喘、抗氧化、保护心脑血管、抗溃疡、镇痛、激素调节等多种药理学作用。目前,对厚朴酚免疫活性和抗炎活性的研究取得一定成果,但其作用机制仍待进一步拓展研究。目的:本实验旨在对厚朴酚对人相关免疫细胞活性及功能的影响进行初步研究,在建立人源U937巨噬细胞炎症模型的基础上,研究厚朴酚的抗炎活性,并对其作用机制进行初步探讨。以期丰富厚朴酚免疫抗炎活性基础研究实验数据,为其作为相关抗炎药物的研发提供实验依据和参考。方法:我们通过MTT法检测厚朴酚对U937巨噬细胞及人LO-2正常肝细胞的毒性,确定厚朴酚无毒浓度范围;流式细胞术和激光共聚焦检测厚朴酚对U937巨噬细胞巨噬细胞吞噬功能的影响;CCK-8法检测厚朴酚对人外周血淋巴细胞(PBMC)、T细胞增殖活性的影响;通过脂多糖(LPS)诱导成熟分化的U937巨噬细胞来构建细胞炎症模型;Griess试剂检测厚朴酚对LPS诱导U937巨噬细胞生成NO的影响;Real-time PCR检测厚朴酚对LPS诱导U937巨噬细胞表达炎性因子的影响;ELISA法检测厚朴酚对LPS诱导U937巨噬细胞分泌炎性因子的影响;Western blotting和激光共聚焦检测厚朴酚对LPS诱导U937巨噬细胞相关信号通路的影响。结果:厚朴酚浓度≤40μM时,对U937巨噬细胞无毒;其浓度在10-40μM时呈浓度依赖性增强细胞吞噬功能,40μM时对细胞吞噬功能增强近50%;1-20μM浓度范围,厚朴酚对PBMC的存活有明显抑制作用;1μM时对T细胞的增殖有明显抑制作用,而10、20μM则起促进作用。在1-40μM浓度范围,能显著抑制LPS诱导引起的NO产生;能浓度依赖性抑制IL-1β、TNF-α的mRNA表达,40μM高浓度时效果最显著;能浓度依赖性抑制IL-1β蛋白的分泌,当浓度为10、20μM时,对TNF-α蛋白的分泌无明显影响,而在40μM时则有显著抑制作用;其对MAPK信号通路中的ERK1/2部分并无明显影响,能下调JNK、p38的磷酸化水平;其能抑制NF-κB信号通路中IκBα的磷酸,浓度依赖性下调p65的磷酸化水平。结论:厚朴酚在体外能增强U937巨噬细胞的吞噬功能;抑制PBMC的存活;低浓度能抑制T细胞增殖,高浓度则起促进作用。有明显的抗炎活性,可能是通过下调MAPK信号通路JNK、p38的磷酸化水平,下调NF-κB信号通路中IκBα、p65的磷酸化水平发挥抗炎活性。