目的：
研究18种具有肾毒性的中药对小鼠肾脏有机阴离子转运体(OATs)中3个主要亚型(Oat1,Oat2, Oat3)和对应mRNA表达以及细胞色素氧化酶P450主要成员Cyp3a(肝脏及小肠)、Cyp2e1(肝脏)活性的影响。
方法：
肉桂等18种肾毒性中药水煎剂分别(以高、低两个剂量)灌胃给NIH小鼠(雌雄各半)2次/d,连续5d。最后一次给供试物1h后实施对-氨基马尿酸(PAH, iv,30mg·kg-1)清除试验：在注射PAH后1.0、2.5、5.0、7.5、10.0及20.0min时从每组分别各取10只小鼠安乐处死收集全血并迅速摘取右肾。另取NIH小鼠(雌雄各半,10只/每组),最后一次给供试物后1h,断头处死(放血),取右肾实施肾切片摄取试验。另取NIH小鼠(雌雄各半,10只/每组),最后一次给供试物1h后安乐处死,取肝/肾/肠,进行CYPs及OATs mRNA表达的测定。取对-氨基马尿酸清除试验中5个时间点的右肾做肾组织匀浆液；取肾切片摄取实验中的白头翁、延胡索、草乌、川乌、独活、皂角刺、虎杖、甘遂、侧柏叶、木香等10种中药高、低剂量组的右肾做肾切片；采用差速离心法分离肝/肠微粒体；以Folin-酚法定量各组肾组织匀浆液、肾切片匀浆液及肝/肠微粒体中的蛋白浓度,紫外分光光度法测定小鼠血清、肾组织/肾切片匀浆液中的PAH浓度及Cyp3a、Cyp2el酶活性,以药动学软件(DAS2.0)分析血中PAH的主要药动学参数；取CYPs试验中的肉桂、细辛、冬虫夏草、益母草、番泻叶、蜈蚣、苦参、厚朴等8种肾毒性中药高剂量组的左肾提取总mRNA,以实时荧光定量法定量小鼠肾脏中Oat1,Oat2,Oat3mRNA的表达。
结果：
血清中PAH的药动学研究表明,益母草高剂量组,蜈蚣高、低剂量组,苦参高剂量组,延胡索高剂量组,草乌高、低剂量组,独活高剂量组,虎杖高、低剂量组,侧柏叶高剂量组的t1/2β显著延长(P<0.05-0.01)；所有这18种中药的高、低剂量组的Vd均变小(P<0.01)；除细辛低剂量组、益母草低剂量组、独活低剂量组、皂角刺低剂量组、甘遂低剂量组外,所有其他供试物组的CL和AUC0-20min均发生显著性变化：CL变缓(P<0.01),AUC0-20min增大(P<0.05～0.01)
与纯水对照组相比,除冬虫夏草低剂量组、蜈蚣低剂量、白头翁低剂量组、草乌低剂量组,其他供试物组肾匀浆液中PAH蓄积量均明显高于纯水组(P<0.05～0.01)。
肾脏摄取实验的结果发现,延胡索高剂量,草乌高、低剂量,皂角刺高、低剂量,甘遂高剂量,侧柏叶高、低剂量,木香高剂量组摄取的PAH量明显低于纯水组(P<0.05-0.01),其余各组与纯水组相比均无显著性差异(P<0.05)。
与CMC组相比,丙磺舒组的Oatl、Oat3mRNA被显著上调(P<0.05～0.01),Oat2mRNA被显著下调(P<0.05)；与纯水组相比,细辛、冬虫夏草、益母草、番泻叶、厚朴各组小鼠肾脏Oatl mRNA表达水平被显著上调(P<0.05～0.01),蜈蚣组的Oatl mRNA表达水平则被显著下调(P<0.05)；肉桂、冬虫夏草、益母草、番泻叶、厚朴各组在小鼠肾脏中的Oat2mRNA被显著上调(P<0.01)；肉桂、厚朴两组的Oat3mRNA表达水平被显著上调(P0.05)。以氨基比林为底物：细辛高、低剂量组,番泻叶高剂量组,蜈蚣高、低剂量组,苦参高、低剂量组,延胡索高、低剂量组,独活高、低剂量组,皂角刺高剂量组,虎杖高、低剂量组,木香高剂量组的酶活性显著高于纯水组(P<0.01);冬虫夏草高、低剂量组,益母草高、低剂量组,厚朴高、低剂量组,白头翁高剂量组,草乌高剂量组,川乌高、低剂量组,皂角刺低剂量组,木香低剂量组的酶活性显著低于纯水组(P<0.05～0.01),而其他供试物组与纯水组相比无显著性差异(P>0.05)。
在肠道微粒体实验中,不论以红霉素还是以氨基吡啉为底物,细辛高剂量组,蜈蚣高剂量组,独活高剂量组,虎杖高、低剂量组,木香高、低剂量组酶活性显著高于纯水组小鼠(P<0.05～0.01)；肉桂高剂量组,冬虫夏草高、低剂量组,苦参高、低剂量组,厚朴高、低剂量组,白头翁低剂量组,延胡索高、低剂量组,川乌高、低剂量组,甘遂高剂量组,侧柏叶高、低剂量组酶活性显著低于纯水组(P<0.05～0.01),其他供试物组与纯水组相比无显著性差异(P>0.05)。
测定肝微粒体Cyp2e1活性时,肉桂高、低剂量组,益母草高、低剂量组,蜈蚣高、低剂量组中的Cyp2e1活性明显低于纯水对照组(P<0.01)；细辛高、低剂量组,苦参高、低剂量组,白头翁高、低剂量组,延胡索高、低剂量组,草乌高、低剂量组,川乌高、低剂量组,独活高、低剂量组,侧柏叶高、低剂量组,木香高、低剂量组,冬虫夏草高剂量组,番泻叶高剂量组,厚朴高剂量组,皂角刺高剂量组,甘遂高剂量组中的Cyp2e1活性明显高于纯水对照组(P<0.01)；而其他剂量组与对照组相比并无明显差异(P>0.05)。
结论：
所查18种肾毒性中药可能通过抑制有机阴离子转运体的3个主要成员(即0AT1,OAT2,OAT3)导致肾脏损伤,对小鼠肝脏和肠道中的Cyp3a及肝脏中的Cyp2e1均有明显的作用(抑制或诱导)。
