近年来研究表明,柑橘幼果中黄酮类化合物种类丰富,含量较高,但每年6月份有许多柑橘幼果脱落,为了综合利用柑橘幼果落果资源,用乙醇溶液提取四种柑橘幼果中的黄酮,制备干燥粉状黄酮提取物,分析提取物中黄酮类化合物的种类和含量,并用四种抗氧化体系分析其抗氧化活性,研究不同浓度七种柑橘黄酮单体的抗氧化活性以及不同浓度单体间两两组合的协同抗氧化效应,最后对柑橘黄酮提取物、黄酮单体与茶多酚、抗坏血酸之间的抗氧化协同增效作用进行研究。
(1)选用胡柚,瓯柑,椪柑,温州蜜橘四种柑橘幼果落果作为实验原料,制备柑橘黄酮提取物,研究了其中黄酮类化合物的种类和含量。结果显示,不同品种柑橘黄酮提取物中含有黄酮类化合物的种类和含量各不相同。总黄酮含量大小顺序为:胡柚(385.61 mg/g DW)＞瓯柑(228.57 mg/g DW)＞椪柑(161.04 mg/gDW)＞温州蜜橘中(67.35 mg/g DW),胡柚中含量最高的黄酮为柚皮苷(220.87mg/g DW),瓯柑中为新橙皮苷(121.3 mg/g DW),椪柑中为橙皮苷(59.3 mg/gDW),温州蜜橘中为橙皮苷(49.74 mg/g DW),温州蜜橘黄酮提取物得率最高。
用DPPH,FRAP,ABTS,TBARS四种抗氧化体系对四种柑橘幼果黄酮提取物的抗氧化活性进行评价,四种体系中,柑橘幼果黄酮提取物在100-2000μg/ml浓度下,抗氧化活性随着浓度增加而增强。FRAP,ABTS,TBARS三种抗氧化体系中,四种柑橘黄酮提取物的抗氧化活性顺序为:胡柚＞瓯柑＞椪柑＞温州蜜橘。与提取物中总黄酮的含量顺序一致。DPPH体系中,四种柑橘黄酮提取物的抗氧化活性顺序为:胡柚＞椪柑＞瓯柑＞温州蜜橘。可见不同体系抗氧化活性有差别。
(2)用DPPH,FRAP两种抗氧化体系评价不同浓度七种柑橘黄酮单体(槲皮素,芦丁,橙皮素,橙皮苷,新橙皮苷,柚皮素,柚皮苷)的抗氧化能力,并选用其中六种黄酮单体(槲皮素,芦丁,橙皮素,橙皮苷,柚皮素,柚皮苷)不同浓度组合分析抗氧化协同增效作用。结果显示,DPPH,FRAP两体系中,在0-1.0 mmol/l浓度范围内,七种柑橘黄酮单体的抗氧化活性随着浓度的增加而增强。七种黄酮单体的抗氧化活性顺序都为:槲皮素＞芦丁＞新橙皮苷＞橙皮素＞橙皮苷＞柚皮素＞柚皮苷。黄酮糖苷与对应的苷元的抗氧化活性相近,且苷元的抗氧化活性大于糖苷。DPPH体系中,分析不同浓度六种黄酮单体抗氧化协同效应,发现槲皮素和芦丁不仅本身具有很好的抗氧化活性,与其他黄酮单体组合时,具有较好的协同增效作用。
(3)用DPPH,FRAP两种抗氧化体系评价不同浓度胡柚和瓯柑两种柑橘黄酮提取物与不同浓度的茶多酚、抗坏血酸之间的抗氧化协同作用,以及七种柑橘黄酮单体与不同浓度的茶多酚、抗坏血酸之间的抗氧化协同作用。结果显示,两体系中,天然抗氧化剂之间存在一定抗氧化协同增效作用。抗氧化协同增效作用与抗氧化体系,抗氧化物质本身的抗氧化能力,以及抗氧化物质的有效浓度有关。
在DPPH体系中,胡柚黄酮提取物只在低浓度(400μg/ml)时与茶多酚表现抗氧化协同增效作用,瓯柑黄酮提取物与茶多酚之间在各个浓度下无协同增效性。在FRAP体系中,两种柑橘黄酮提取物与茶多酚之间在各个浓度下均表现出不同的抗氧化协同增效性。提取物在高浓度(1600μg/ml)下增效性更明显(P＜0.05)。在DPPH体系中,胡柚黄酮提取物只在低浓度(400μg/ml)时与抗坏血酸表现抗氧化协同增效作用,瓯柑黄酮提取物与抗坏血酸之间在各个浓度下均表现抗氧化协同增效性。在FRAP体系中,两种柑橘幼果黄酮提取物在高浓度(1600μg/ml)时与抗坏血酸组合均表现良好的抗氧化协同作用(P＜0.05)。
研究黄酮单体与茶多酚,抗坏血酸之间的抗氧化协同作用时发现,在DPPH体系中,槲皮素和芦丁这两种高效抗氧化剂与茶多酚之间未表现出协同增效作用,另外五种黄酮单体与茶多酚组合均表现出一定抗氧化协同效应。在FRAP体系中,槲皮素和芦丁与茶多酚表现出显著的协同增效作用(P＜0.05)。其他几种单体与茶多酚之间的协同作用则表现的不明显。黄酮单体与抗坏血酸组合,在两种体系中都表现出良好的协同增效作用(P＜0.05),且随着抗氧化剂的有效浓度增高,协同增效作用越明显。
