金钱草粗多糖利尿排石作用机理初探

金钱草,为报春花科植物过路黄(Lysimachia christinae Hance)的干燥全草,是利湿退黄、利尿通淋、利湿消肿的要药,对于预防和治疗尿路结石具有良好的效果。金钱草作为市场畅销品种,需求量呈逐年递增的趋势,四川作为主产区之一,拥有丰富的药材资源。植物多糖具有生物活性广泛、毒副作用小的特点,作为当今生命科学和医药科学的研究重点,各国掀起了多糖研究的热潮。金钱草中多糖含量约有8%,含量丰富,故宜加大对金钱草的基础研究,为进一步开发利用金钱草提供理论依据和基础数据。 目前,对于金钱草黄酮的化学成分和药理作用研究相对比较深入、全面,而对于金钱草多糖的研究则鲜有人问津。本文对金钱草多糖的提取工艺进行了优选,对多糖的醇沉工艺进行了系统的研究,用Sevag法脱蛋白和大孔树脂法对多糖进行精制。金钱草黄酮在利尿排石、抗炎镇痛方面效果显著,而本文研究结果表明金钱草多糖在利尿方面同样有作用,且表现出一定的抗炎、镇痛趋势,主要表现在：金钱草多糖“利尿缓慢而持久、利尿不伤钠钾”,能一定程度地缓解小鼠炎性介质渗出、减少疼痛扭体次数。故文章以金钱草多糖部位为研究对象,以金钱草多糖的提取工艺研究和药理作用研究为主要研究内容,从金钱草多糖部位制备工艺的优选、药理药效的研究展开工作,研究成果如下： 1金钱草多糖部位的制备 建立了金钱草多糖含量测定的苯酚—硫酸法(Y=0.015X-0.058,R2=0.9998)；设计了以溶剂用量、浸提次数和时间为考察因素的正交实验,优选出金钱草多糖提取工艺为：加12倍量热水,浸提3次,每次30min;以多糖得率和多糖纯度为指标设计单因素实验系统研究了金钱草多糖的醇沉工艺,筛选出多糖的最佳醇沉工艺为：调节药液浓度为0.25g生药/mL,加入乙醇至醇含量为80%,室温(25℃)条件下静置12h,过滤并收集沉,沉淀加水溶解,重复操作3次：建立了蛋白含量测定的考马斯亮蓝法(γ=6.3685X+0.0833,r=0.9994),研究发现金钱草多糖蛋白脱除率仅为23.05%；以多糖纯度和保有率为指标研究筛选出了金钱草多糖的DHP-20型大孔树脂纯化工艺为：DHP-20型大孔树脂(Φ)20mm,长300mm,体积约30ml),粗多糖浓度为10mg/mL,料液比为1:10(mL/g),上样速度为2mL/min,20%2乙醇为洗脱剂,洗脱速度为2mL/min;最后优选出了金钱草多糖的干燥工艺为50℃下减压干燥。 2金钱草多糖部位的药理研究 将筛选合格的大鼠按体重随分成空白组、氢氯噻嗪组(阳性组)和多糖低、中、高剂量组。分别以各时间点(第1h、2h、4h和6h)各组动物的尿量变化,以及各组动物尿液中(Na、K+、Cl-)的排出量情况为指标,研究其药理作用,发现金钱草多糖有促进排尿的趋势,能一定程度地促进原尿中Na+、K+、Cl-1的排出,其实验结果无统计学差异(p>0.05)；分别以乙酰胆碱(Ach)和去甲肾上腺素(NA)为工共药,以受试药物对各组大鼠离体膀胱平滑肌和离体尿道平滑肌的作用为研究对象,研究其利尿机理发现,金钱草多糖对离体膀胱平滑肌有一定的收缩作用,但无显著性差异(p>0.05),能明显抑制NA造成的尿道平滑肌收缩作用,有显著性差异(p<0.05)；最后,以二甲苯致小鼠耳廓肿和醋酸致小鼠扭体实验法进行抗炎镇痛实验研究发现,金钱草多糖具有一定的抗炎、镇痛功效,但实验结果无显著性差异(p>0.05)。 3结论 文章对金钱草多糖的提取、纯化工艺工程进行了研究,研究数据可为实际生产提供一定参考。本文对比了热水浸提及水煎煮工艺并优选了热水浸提工艺;首次对金钱草多糖醇沉工艺的系统研究优选出了多糖的醇沉工艺;金钱草粗多糖脱蛋白工艺的研究表明了Sevag法不适合用于金钱草粗多糖脱蛋白，粗多糖经大孔树脂精制后损失较为严重(保有率仅为48.5%)，故金钱草多糖不宜采用大孔树脂精制；50℃下减压干燥较适合于金钱草多糖提取物的干燥。药理研究表明,金钱草多糖能一定程度地收缩大鼠膀胱平滑肌,显著扩张大鼠离休尿道平滑肌而发挥利尿作用，其利尿作用“缓慢而持久、利尿不伤钠钾”,有一定的抗炎、镇痛趋势。