腺苷A1受体在癫痫发病机制中的作用及其与GABA信号通路相关性的研究

第一部分 腺苷A1受体对氯化锂-匹鲁卡品致痫后大鼠海马神经元损伤的作用及机制研究 目的：探讨腺苷A1受体对氯化锂-匹鲁卡品致痫后海马神经元损伤的作用及可能机制。 方法：实验动物随机分为正常组,致痫组,致痫+腺苷A1受体阻断剂(DPCPX)组,致痫+腺苷A1受体激动剂(2-CAdo)组,采用氯化锂-匹鲁卡品点燃制作癫痫模型,其中正常组不做任何干预,致痫+DPCPX组制作癫痫模型前后采用DPCPX干预,致痫+2-CAdo组制作癫痫模型前后采用2-CAdo干预,每组分为1d、14d、30d三个时间点,利用HE染色观察海马神经元病理形态学变化,采用TUNEL染色方法检测海马神经元凋亡。 结果： 1.正常组大鼠海马CA3区神经元HE染色可见：神经元排列整齐,轮廓清晰,胞核呈圆形或椭圆形,结构完整。致痫组大鼠海马CA3区HE染色可见：癫痫发作后1d细胞结构基本正常,排列欠整齐,部分神经细胞肿胀、粗大,形态不完整；随着癫痫发作时间延长,14d、30d可见神经元细胞排列紊乱,轮廓模糊,界限不清,胞核固缩,胞体皱缩,胞浆空泡,失去正常结构,出现明显神经元变性,坏死。 2.同一时间点,与致痫组相比,致痫+DPCPX组海马CA3区HE染色可见：神经元细胞排列更加紊乱,细胞水肿、胞浆空泡、神经元变性坏死等结构损害程度加重；致痫+2-CAdo组海马CA3区HE染色可见：细胞排列基本规整,细胞水肿、胞浆空泡、神经元变性坏死等结构损害程度减轻。 3.大鼠海马CA3区神经元TUNEL检测可见：正常组1d、14d、30d三个时间点海马神经元凋亡指数无明显差异(p>0.05)。同一时间点内,致痫组与正常组相比,出现明显神经元凋亡,凋亡指数明显升高,差异具有统计学意义(p<0.01)；与致痫组相比,致痫+DPCPX组神经元凋亡增加,凋亡指数明显升高,差异具有统计学意义(p<0.01)；致痫+2-CAdo组神经元凋亡减少,凋亡指数明显降低,差异具有统计学意义(p<0.01)。 结论： 1.腺苷A1受体能够减轻细胞水肿,降低神经元凋亡。 2.腺苷A1受体对氯化锂-匹鲁卡品致痫后海马神经元损伤具有神经保护作用。 第二部分 腺苷A1受体抗癫痫作用与GABA信号通路相关性的研究 目的：探讨腺苷A1受体对GABA信号通路的影响及其抗癫痫作用机制。 方法：实验动物随机分为正常组,致痫组,致痫+腺苷A1受体阻断剂(DPCPX)组,致痫+腺苷Al受体激动剂(2-CAdo)组,采用氯化锂-匹鲁卡品点燃制作癫痫模型,其中正常组不做任何干预,致痫+DPCPX组制作癫痫模型前后采用DPCPX干预,致痫+2-CAdo组制作癫痫模型前后采用2-CAdo干预,每组分为1d、14d、30d三个时间点,利用免疫组化方法观察海马γ-氨基丁酸受体表达水平的变化,采用Western blotting检测谷氨酸脱羧酶、γ-氨基丁酸转氨酶及γ-氨基丁酸转运体表达水平的变化。 结果： 1.GABA受体的表达：正常组大鼠海马1d、14d、30d三个时间点GABA(A)与GABA(B)受体表达水平无明显差异；同一时间点致痫组GABA(A)与GABA(B)受体表达水平较正常组减少(p<0.05)。同一时间点,与致痫组相比,致痫+DPCPX组GABA(A)与GABA(B)受体表达水平明显减少(p<0.05)；致痫+2-CAdo组GABA(A)与GABA(B)受体表达水平明显增加(p<0.05)。 2.GAD的表达：正常组1d、14d、30d三个时间点GAD表达水平无明显差异。同一时间点,与正常组相比,致痫组GAD表达水平下调,两者之间差异具有统计学意义p<0.05)。同一时间点,与致痫组相比,致痫+DPCPX组GAD表达水平下调,两者之间差异具有统计学意义(p<0.05)；致痫+2-CAdo组GAD表达水平上调,两者之间差异具有统计学意义(p<0.05)。 3.GABA-T的表达：正常组1d、14d、30d三个时间点GABA-T表达水平无明显差异。与正常组相比,致痫组1d、14d两个时间点GABA-T表达水平无明显差异,30d时间点GABA-T表达水平上调,差异具有统计学意义(p<0.05)。与致痫组相比,致痫+DPCPX组1d时间点,GABA-T表达水平两者之间无明显差异;14d、30d两个时间点,GABA-T表达水平上调,差异具有统计学意义(p<0.05)；致痫+2-CAdo组1d时间点,GABA-T表达水平两者之间无明显差异；14d、30d两个时间点,GABA-T表达水平下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。 4.GAT-1与GAT-3的表达：正常组1d、14d、30d三个时间点GAT-1与GAT-3表达水平无明显差异。同一时间点,致痫组与正常组相比,GAT-1与GAT-3表达水平下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。同一时间点,致痫+DPCPX组与致痫组相比,GAT-1与GAT-3表达水平上调,差异具有统计学意义(p<0.05)。与致痫组相比,致痫+2-CAdo组1d、14d两个时间点,GAT-1与GAT-3表达水平下调,差异具有统计学意义(p<0.05)；30d时间点,GAT-1与GAT-3表达水平两者之间无明显差异。 结论： 1.腺苷A1受体能够促使GABA(A)与GABA(B)受体表达水平上调；增加GAD表达水平；降低GABA-T与GAT表达水平。 2.腺苷A1受体抗癫痫作用与GABA信号通路密切相关。