松茸多糖的分离纯化及其活性研究

本论文以松茸(Tricholoma matsutake Sing.)为研究对象,对其中的多糖组分进行了提取、分离、纯化、结构鉴定及生物活性等方面的初步研究。采用热水浸提、超滤分级、乙醇沉淀的方法从松茸子实体中提取得到粗多糖。粗多糖经过DEAE-Sepharose F.F离子交换柱层析和Sephadex G-100凝胶柱层析分级纯化,苯酚-硫酸法跟踪检测,得到二个多糖组分(TMS-1、TMS-2)。经过高效液相色谱法验证,所得的二个多糖组分为分子量均一的多糖组分,分子量分别约为TMS-1(22180 Da)、TMS-2(16450 Da)。采用GC-MS确定了这两个多糖的单糖组成及摩尔比例: TMS-1是由半乳糖和3-甲氧基半乳糖组成的半乳聚糖,其摩尔比为1.23:1.55; TMS-2由鼠李唐、甘露糖、葡萄糖组成,其摩尔比为1.25:1.51:4.85。经甲基化化学分析法,并结合核磁共振波谱技术(一维:1H NMR, 13C NMR,二维:H-H COSY谱、HMQC谱、HMBC谱、DEPT谱),确定其分子结构为: TMS-1 :l→)–α–Gal–(l→6)–3–O–CH3–α–Gal–(l→;TMS-2:主链由(l→6)–α–Glc, (l→2,4)-α–Man组成,支链带有l→)–α–Rha。通过体外抗氧化实验(DPPH自由基体系、02-自由基体系、·OH自由基体系),分别研究了松茸粗多糖提取物TMS、松茸多糖均一组分TMS-1和TMS-2的抗氧化活性。结果表明,TMS、TMS-1、TMS-2均具有一定的抗氧化活性。一定浓度范围内,随着浓度增加,抗氧化活性逐渐增强,并且成有效的量-效关系。在三种体外抗氧化体系中,TMS-1在·OH自由基体系中的活性较高,在0.4-0.6mg/mL浓度条件下的清除效果比同浓度的维生素C稍高,将其应用于抗氧化保健食品的研究,可以减少自由基对机体产生损伤或致突变作用,具有良好的开发前景。TMS-2对正常细胞株和肿瘤细胞株辐射存活率的测试实验结果表明:在X-ray辐照条件下松茸多糖TMS-2在50μg/ mL浓度时使正常细胞株的存活率提高了51.77%,而对照组肿瘤细胞株的存活率仅提高了6.33%,与对照组相比,差异性显著。说明TMS-2在显著保护正常细胞的同时对肿瘤细胞仅有轻度保护作用,并呈有效的量-效关系。如能将松茸多糖TMS-2用于治疗肿瘤的放化疗过程中,可以在杀伤肿瘤细胞的同时,保护正常的组织细胞,极大地降低放化疗的毒副作用,增强放化疗患者的体质、提高承受力、减轻患者的痛苦,这使得松茸多糖TMS-2在放射治疗肿瘤的临床应用上具有极大意义。