寒冷是北方地区动物面临的主要应激源,研究表明寒冷地区冷应激可直接影响畜禽的健康及福利。低温可以增加家禽血清中游离脂肪酸、尿酸水平,降低血糖水平、脂质代谢增强。免疫反应和代谢调节高度统一,功能上相互依赖。冷应激后机体大量的能量被用于分解代谢,而保障供给免疫和炎症的活化的能量减少,使机体产生代谢性炎症。本实验探讨了冷应激对鸡肝脏脂质代谢和炎性因子的影响,应用基因克隆技术在原核表达系统中表达了PPARα和AMPKα并制备了多克隆抗体,以雏鸡为研究对象,进行急、慢性冷应激(12±1℃)处理,检测了血清生化指标、肝脏脂联素、PPARα、AMPKα等脂质代谢相关基因表达及含量、肝脏炎症相关基因表达及含量、肝脏热休克蛋白基因表达。结果表明：
1.利用原核表达载体表达PPARα和AMPKα融合蛋白免疫新西兰白兔,成功制备了兔抗鸡PPARα和AMPKα多克隆抗体。
2.急、慢性冷应激可引起鸡血清FFA、TG、GHO、LDL、HDL含量和ALT活性改变,提示冷应激能够使机体脂质代谢增加,为机体提供能量供应;还表明冷应激可引起肝脏的损伤。
3.急、慢性冷应激可引起鸡肝脏脂联素、AdipoR1和AdipoR2含量以及mRNA表达量增加,提示冷应激可能通过脂联素途径增加机体脂质代谢。
4.急、慢性冷应激时,鸡肝脏PPARα、AMPKα蛋白表达增加,肝脏AMPKα1、AMPKα2、 CPT1、ACAO含量增加,肝脏ACC、丙二酰辅酶A含量降低,肝脏PPARα、LXRα、AMPKα1、 AMPKα2、CPT1mRNA表达增加,肝脏ACC mRNA表达降低,提示冷应激可能通过脂联素-PPARα-AMPKα途径增加机体脂质代谢。
5.急、慢性冷应激时,鸡肝脏炎性基因PGE synthase、Cox-2、NF-kB蛋白表达增加,肝脏PGE synthase、Cox-2、NF-kB、TNFα、iNOS、HO-1mRNA表达增加,提示这些基因的表达可能参与了冷应激致鸡肝脏炎症的过程。
6.急、慢性冷应激时,鸡肝脏HSP70、GRP78蛋白及nRNA表达量升高,并首次证实,急、慢性冷应激可引起鸡肝脏HSP60、HSP90mRNA表达增加。提示机体可以通过HSP途径抵抗冷应激致鸡肝脏的损伤。
综上所述,冷应激可通过脂联素-PPARa-AMPKa途径调节鸡肝脏脂质代谢,并引起ALT活性增加,伴有肝脏PGE synthase、Cox-2、NF-kB、TNFα、iNOS、HO-1)和HSP70、GRP78、 HSP60、HSP90表达上调,表明冷应激可致鸡脂质代谢紊乱、肝脏损伤,并伴随着炎症相关基因和热休克蛋白基因的上调,为探讨冷应激致鸡代谢性炎症的机制提供理论基础和实验依据。
