真武汤对心力衰竭大鼠心室重构及心功能的影响

目的:通过观察真武汤对心力衰竭(心肾阳虚证)大鼠心脏FS、EF,血清脑钠肽(BNP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、可溶性ST2(s ST2)、IL33,以及心肌组织中AngⅡ、ALD、AT1蛋白表达的影响,来探讨真武汤治疗心力衰竭的作用机制,丰富中医温阳利水的治法,同时为临床辨证治疗施以真武汤提供科学的实验数据与理论基础。材料与方法:选用80只健康雄性wistar大鼠为研究对象,随机选取10只为空白组,对其余70只通过手术结扎冠脉前降支近端,术后待伤口愈合,结合力竭式游泳,复制心梗后心力衰竭心肾阳虚模型。把造模成功后存活的50只大鼠随机分为真武汤高剂量组、中剂量组、低剂量组,西药组和模型组5组,每组10只,分别予以真武汤高剂量组相当生药量37.8g/(kg·d),中剂量组相当生药量18.9g/(kg·d),低剂量组相当生药量9.45g/(kg·d),均制成6ml,每日两次灌胃,每次3ml,持续15天。西药组予以卡托普利10mg/(kg·d)灌胃,均制成6ml,每日两次灌胃,每次3ml,持续15天。空白组、模型组予生理盐水3 m L/次,每日两次灌胃,持续15天。实验一采用心脏彩色超声多普勒测定大鼠心脏EF、FS值;ELISA方法测定心力衰竭大鼠血清脑钠肽(BNP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、可溶性ST2(s ST2)、IL33。实验二采用免疫印迹法(Western blotting)方法测定心肌组织中AngⅡ、ALD、AT1蛋白的表达情况。统计方法应用SPSS 17.0软件进行统计分析,所测数据结果用均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用单因素方差分析,若方差不齐采用Dunnett检验,P<0.05为结果有显著差异的指标。结果:1.采用冠脉前降支结扎术,成功复制心梗后心力衰竭心肾阳虚大鼠模型。2.心脏彩超FS值与EF值:模型组与正常组比较,FS值与EF值均显著降低(P<0.01),说明模型组大鼠心脏功能受损,存在心室重构,大鼠心力衰竭模型造模成功;中药低剂量组、中剂量组与正常组比较,FS值与EF值均显著降低(P<0.01);中药高剂量组、西药组与正常组比较,FS值与EF值差异无统计学意义(P>0.05);中药高剂量组、西药组与模型组比较,FS值与EF值显著升高(P<0.01),说明真武汤高剂量组与卡托普利组疗效明显。3.血清脑钠肽BNP水平变化:模型组与正常组比较,BNP水平显著升高(P<0.01),有统计学意义,说明模型组大鼠心脏功能受损,大鼠心力衰竭模型造模成功;西药组、中药低剂量组与正常组比较,BNP水平均显著升高(P<0.01),有统计学意义;与西药组比较,中药高剂量组BNP水平明显升高(P<0.05),有统计学意义;西药组与中药低剂量组、中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05);说明真武汤在一定程度上能够改善心力衰竭大鼠的心功能,真武汤高剂量组疗效明显优于卡托普利组。4.血清MMP-9、TIMP-1水平:与正常组比较,各组MMP-9水平均升高(P<0.05),模型组、西药组、中药低剂量组与正常组比较,各组TIMP-1水平下降(P<0.05),有统计学意义;与模型组比较,中药中剂量、高剂量组MMP-9水平下降(P<0.05,P<0.01)、TIMP-1水平显著上升(P<0.01),有统计学意义;与西药组比较,高剂量组MMP-9水平显著下降(P<0.01)、TIMP-1水平显著上升(P<0.01);说明MMP-9、TIMP-1水平与心衰程度相关,真武汤高剂量组疗效明显优于卡托普利组。5.血清ST2、IL-33水平:与正常组比较,各组ST2水平均显著升高(P<0.01),有统计学意义,模型组IL-33水平显著升高(P<0.01),有统计学意义,说明ST2、IL-33水平与心衰程度相关;中药高剂量组、中剂量组与正常组比较IL-33水平差异无统计学意义(P>0.05),中药高剂量组、中剂量组、西药组与模型组比较,ST2、IL-33水平显著降低(P<0.01),有统计学意义;中药高剂量组、中剂量组与西药组比较,ST2、IL-33水平差异无统计学意义(P>0.05);说明真武汤中、高剂量组疗效与卡托普利组疗效无统计学差异(P>0.05),且疗效显著(P<0.01)。6.心肌组织AngⅡ、ALD及AT1蛋白表达:各组大鼠心肌组织AngⅡ、ALD及AT1蛋白表达均高于正常组(P<0.01),西药组与真武汤中、高剂量组可降低大鼠AngⅡ、ALD及AT1水平(P<0.05),真武汤高剂量组降低大鼠的AngⅡ、ALD及AT1水平最为显著(P<0.05),真武汤高剂量组与中剂量组相比AngⅡ蛋白表达具有明显下降趋势(P<0.01)。说明AngⅡ、ALD、AT1蛋白表达与心衰程度相关,真武汤高剂量组疗效显著。结论:1.通过采用冠状动脉结扎法结合力竭式游泳,成功复制心力衰竭(心肾阳虚证)大鼠模型。2.真武汤能够明显提高心力衰竭大鼠心脏EF和FS值,降低血清BNP水平,改善心功能。3.真武汤能够明显降低心力衰竭大鼠血清MMP-9、提高TIMP-1水平;说明真武汤可能通过抑制细胞外基质(ECM)的降解,逆转心室重构。4.真武汤能够明显降低心力衰竭大鼠血清的s ST2、IL33水平,说明真武汤通过IL-33/ST2L信号通路,改善心室重构,从而对心力衰竭大鼠起到治疗作用。5.真武汤能够明显降低心力衰竭大鼠心肌组织AngⅡ、ALD及AT1蛋白的表达,说明真武汤可能通过调控AngⅡ、ALD及AT1的蛋白表达,抑制RAAS系统的激活,从而逆转心室重构,改善心功能。