海带多酚的分离提取及其抗肿瘤活性研究

我国的海带资源十分丰富,海带养殖已成为中国海水养殖的支柱产业之一,产量居世界首位。越来越多的研究表明褐藻多酚具有很广泛的生物活性。为了充分利用海带,开发纯度较高的海带多酚,本论文以中国沿海常见的褐藻门海带为原料,依据药物高通量筛选理论,以抗肿瘤活性为目的,提取分离了海带中活性物质--海带多酚。 1、以单因素试验优化海带多酚的提取工艺,80%乙醇常温避光浸提海带粉末,12小时反复两次。氯仿脱色7小时,得到海带多酚粗提物。得率为24.25mg/kg海带。等体积乙酸乙酯进一步萃取,单因素试验优化萃取条件得到:pH值为3.4,萃取30分钟,两次。得率为10.3mg/kg海带。 2、比较四种主要的提取方法:浸提法、索氏回流法、微波法、超声波法。结果表明,微波法提取得率最高。比甲醇浸提法、索氏提取法高62.5%,比超声法高150.5%。通过4因素3水平正交试验优化了微波法提取海带多酚的条件,结果表明:PH=7,中火破碎,时间90s,料液比1:10为微波法提取海带多酚的最优条件。在该条件下得率为34.52mg/kg海带。 3、用葡聚糖凝胶柱G-25对海带多酚提纯物进一步分离纯化,以蒸馏水为流动相,流速为60mL/h洗脱。可以有效分离多酚提取物,未处理生海带提取物为3个组分,处理的熟海带提取物为2个组分。 5、采用MTT法测定海带提取液体外抗肿瘤活性。粗提液对HeLa细胞的IC50为2.32μg·mL-1,使MCF-7和PC12细胞呈现出猝死现象,浓度达到6.91μg·mL-1时可完全抑制三种肿瘤细胞的增殖;乙酸乙酯萃取物对HeLa细胞,MCF-7细胞和PC-12细胞表现为计量依赖型,IC50分别是:0.211μg·mL-1、0.174μg·mL-1、0.158μg·mL-1。当提取物浓度达到0.5μg·mL-1时几乎没有存活细胞。凝胶柱层析得到未处理生海带组分一在浓度为1.45μg·mL-1时抑制率达到72.41%,处理海带组分一在0.30μg/mL时抑制率达到90%以上,组分二浓度大于1.68μg·mL-1时致死率达到90%以上。