苹果多酚中原花青素B2、儿茶素及表儿茶素的大鼠体内药动学

背景苹果多酚是苹果中所含多元酚类物质的通称,是果实在生长发育期间产生的次生代谢物,主要包括羟基肉桂酸类、儿茶素类及其聚合物、黄酮醇类、二氢查耳酮类等。具有很强的抗氧化和抑菌能力,能抑制脂质过氧化,抗肿瘤,抗突变,抗动脉粥样硬化,防治冠心病与中风,防龋齿,防辐射等,在心血管疾病、软骨病、视力退化、过敏、龋齿及中风等病症上的应用具有很高的疗效,在医学及化工领域均有相当大的作用,其优异的药理学活性,必将使其成为新药研究开发领域的新星,而新药开发前的药代动力学的研究十分重要。 目的建立同时测定大鼠血浆中苹果多酚主要活性成分原花青素B2、儿茶素和表儿茶素浓度的HPLC-MS/MS法。采用HPLC-MS/MS法同时测定分别给予高(2g／kg)、中(1.0g／kg)、低(0.5g／kg)浓度的苹果多酚灌胃的大鼠血浆中原花青素B2、儿茶素和表儿茶素的浓度,计算药代动力学参数,了解吸收、分布及消除规律,为新药报批及其临床研究提供理论依据。 方法取雄性健康Wistar大鼠168只,于实验前一天禁食12小时,称重,随机分为低、中、高剂量组各56只,设14个取血点,每个取样点设4只大鼠,用配好的0.20g／mL的苹果多酚溶液按照低(0.5g／kg)、中(1.0g／kg)、高(2g／kg)剂量组灌胃,计时,分别于0,0.083,0.167,0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,12h时,从颈动脉窦采血1.50mL,肝素抗凝,以2000g离心10min,分离血浆,-80℃保存血浆。血浆样品100μL加100ng·mL-1岩白菜素内标溶液10μL,涡旋1min,混匀,加入甲醇0.5mL,涡旋混合2min,10000rpm离心5min,取上清液,40℃水浴N2吹干,100μL流动相溶解。采用HPLC-MS/MS法,测定血药浓度。采用DSA2.0药代动力学程序计算高、中、低剂量原花青素B2、儿茶素及表儿茶素在大鼠体内的药代动力学参数。结果1.原花青素B2、儿茶素和表儿茶素的保留时间分别为4.406min、4.951min.6.188min,岩白菜素的保留时间为4.9min,三者之间达到基线分离,并不受空白血浆和代谢物以及苹果多酚中其他成分的干扰,基质效应在85.76%-100.86%之间；三者的绝对回收率在85.48%-99.35%之间,相对回收率在75.65%～111.00%之间；原花青素B2和儿茶素线性范围为1～100ng·mL-1,表儿茶素为1-500ng·mL-1；直线回归方程：原花青素B2为y=0.0982x-0.0116(R2=0.99241149)；儿茶素为y=0.0168x-0.0043(R2=0.99198981)；表儿茶素为y=0.0050x+0.0028(R2=0.99220807)；最低定量限均为lng·mL-1,相对偏差均小于15%；日内、日间变异均小于11%；血浆样品在-20℃放置24h和7天的稳定性良好,经历两次冷冻-解冻循环以及提取后室温放置6h稳定,相对偏差均小于7.79%。 2.原花青素B2高、中、低剂量的药代动力学参数分别为：t1／2：(1.21±0.08)h,(1.18±0.41)h和(1.09±0.12)h,第一次Tmax均为0.5h,第二次Tmax分别为2h,3h,2h,Cmax分别为(64.78±3.15)ng.mL-1,(30.21±7.89)ng·mL-1和(3.80±0.46)ng.mL-,AUCo-t分别为(194.07±15.22)ng.mL-1·h, (77.20±14.04)ng.mL-1·h和(9.31±0.64)ng.mL-1·h,,AUC0～∞分别为(194.54±15.27)ng.mL-1·h,(77.70±14.19)ng.mL-1·h和(9.76±0.58) ng·mL-1·h。 儿茶素高、中、低剂量的药代动力学参数分别为：t1／2：(1.22±0.15)h,(1.27±0.12)h和(1.29±0.41)h,第一次Tmax均为0.5h,第二次Tmax均为3h,Cmax分别为(125.32±20.37) ng·mL-, (35.42±4.84) ng·mL-1和(13.49±3.90)ng·mL-1,AUCO-t分别为(374.98±44.54)ng·mL-1·h, (120.91±27.60)ng.mL-1·h和(38.17±8.39)ng.mL-1·h,AUC0～∞分别为(376.50±44.86)ng.mL-1·h,(121.40±27.73)ng.mL-1·h和(39.40±7.75) ng.mL-1·h。 表儿茶素高、中、低剂量的药代动力学参数分别为：t1/2：(0.87±0.19)h,(1.04±0.35)h和(0.87±0.19)h,第一次Tmax均为0.5h,第二次Tmax分别为3h,2h,2h,Cmax分别为(827.31±74.43)ng·mL-1,(322.55±38.23)ng.mL-1和(77.43±12.83)ng·mL-1,AUCO-t分别为(2016.20±97.39)ng·mL-1·h, (420.07±14.29)ng.mL-1·h和(122.64±14.25)ng.mL-1·h,AUC0～∞分别为(2017.26±98.06)ng.mL-1·h,(421.86±14.21)ng.mL-1·h和(123.04±14.08)ng.mL-1·h。 结论1.本文建立了同时测定大鼠血浆样品中苹果多酚主要活性成分原花青素B2、儿茶素及表儿茶素的HPLC-MS-MS研究方法。经方法学验证表明该法操作简单、灵敏度高、专属性强、重现性好,可用于动物及人体药动学研究。 2.苹果多酚高、中、低剂量组灌胃后原花青素B2、儿茶素及表儿茶素在大鼠体内的代谢和消除呈线性动力学特征,遵循二室模型一级动力学。 3.原花青素B2、儿茶素及表儿茶素在大鼠体内的血药浓度均呈现两次达峰,表明三种物质可能都存在肝肠循环。 4.原花青素B2、儿茶素及表儿茶素吸收快慢无差异,消除相近,表儿茶素吸收较好。三种物质在大鼠体内分布广泛,并且有可能在某些组织中蓄积。