山药多糖的提取分离及活性初步研究

山药是一种多年生缠绕草质藤本植物,为薯蓣科薯蓣属植物薯蓣（Dioscoreaopposite Thunb.）的块茎,具有健脾、补肺、固肾等功效。多糖是山药中的主要活性成分,具有增强免疫功能,降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老等多种生理活性。本课题以江苏东台产山药为研究对象,对其中的多糖类成分进行了研究,为开发利用山药资源,提供理论依据。 本论文通过单因素和正交试验优化了山药片粗多糖的提取条件,确定了山药片粗多糖的实验室最佳提取条件为:提取温度100℃,提取时间为3h,料液比为1:12,pH为8,提取液真空浓缩至原体积的1/5,所用95%乙醇的体积为多糖浓缩液体积的3倍。采用该工艺提取的山药粗多糖,粗多糖得率为11.58%,苯酚—硫酸法测定山药多糖含量为67.03%。 以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,对山药粗多糖中蛋白质脱除方法（盐酸法、三氯乙酸法、胰蛋白酶法）进行了比较,确定最佳方法为胰蛋白酶法,最佳条件为:浓度1mg/ml山药粗多糖溶液10ml,酶用量0.5ml,酶解时间45 min,酶解温度37℃。在此条件下,蛋白脱除率为88.7%,多糖保留率为93.1%。 山药多糖经除蛋白、除色素、流水透析后经DEAE—52纤维素层析柱,得到RDPd-Ⅰ、RDPd-Ⅱ两种组分,再分别过Sephadex G-100凝胶柱进一步纯化,得到RDPs-Ⅰ、RDPs-Ⅱ两组分,经高效液相检测,呈单一对称峰,表明达到一定的均一纯度。 采用UV、IR、HPLC等现代分析手段,分析了山药多糖的两种组分RDPs-Ⅰ、RDPs-Ⅱ。紫外光谱在260nm-600nm处无明显的吸收,表明经分离纯化的山药多糖的两种组分RDPs-Ⅰ、RDPs-Ⅱ均不含核酸、蛋白质,红外光谱显示有糖的特征吸收峰。RDPs-Ⅰ、RDPs-Ⅱ红外图谱中未见810cm-1和870cm-1处的吸收峰,可能均不含甘露糖。HPLC测定分子量结果为:RDPs-Ⅰ分子量为7.62×10～3 Da,RDPs-Ⅱ分子量为6.74×10～4 Da。 论文对山药粗多糖的药理活性进行了初步研究,山药粗多糖对正常小鼠的体重、血糖值、肝糖原含量没有影响。山药粗多糖具有降低糖尿病小鼠血糖、血脂的作用,能够提高糖尿病小鼠葡萄糖耐受能力,促进肝糖原合成,增加肝糖原含量。体外抗肿瘤试验表明:山药多糖纯化后得到的RDPs-Ⅰ、RDPs-Ⅱ在浓度较低时,对人肝癌细胞HepG2呈现促进作用;RDPs-Ⅱ对HepG2细胞有一定的抑制作用。