黄芪作为常用的中草药,它是豆科多年生草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根,有托疮生肌、利尿排毒、利水消肿和补气固表等功效。黄芪多糖作为黄芪中的主要有效成分,具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂、免疫调节和保肝、护肝等作用,目前在临床上已经得到了广泛应用。
肿瘤免疫逃逸,促进了肿瘤的生长与转移,是肿瘤没有较好疗效的一个原因。髓样抑制细胞是肿瘤组织中聚集着的一群表面标志为Gr-1+CD11b+的异质细胞,是引起免疫逃逸的重要细胞群体。抑制机体髓样抑制细胞的生成,进而减轻肿瘤所产生的免疫逃逸现象,目前已经成为了肿瘤治疗的新方向。由于对黄芪多糖抗肿瘤免疫机制的研究主要涉及：巨噬细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等方面,但对髓样抑制细胞方面的研究较少。为此,本论文以B16-F10荷瘤鼠作为研究对象,探讨黄芪多糖对B16-F10荷瘤鼠髓样抑制细胞的影响及其抗免疫耐受分子机制,为黄芪多糖的抗肿瘤免疫效应机制提供新的依据。具体工作内容如下：
1.建立B16-F10荷瘤鼠模型,通过检测B16-F10荷瘤鼠的肿瘤体积变化和抑瘤率,观察黄芪多糖的体内抑瘤作用；并利用流式细胞术检测脾脏中Gr-1+CD11b+髓样抑制细胞比例,观察黄芪多糖对B16-F10荷瘤鼠髓样抑制细胞的影响；同时采用流式细胞术检测脾脏中调节性T细胞比例、酶联免疫吸附法检测血清中IL-10、TGF-β、VEGF、IFN-γ和TNF-α的分泌水平,研究黄芪多糖对髓样抑制细胞的抗免疫耐受分子机制。结果显示：造模第六天,与模型组相比,黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖低剂量+CTX组、黄芪多糖高剂量组和黄芪多糖高剂量+CTX组的肿瘤被显著抑制(P<0.01)。造模第六天、第八天、第十天和第十二天,与CTX组相比,黄芪多糖低剂量+CTX组和黄芪多糖高剂量+CTX组的肿瘤均被显著抑制(P<0.01)。CTX组、黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖低剂量+CTX组、黄芪多糖高剂量组和黄芪多糖高剂量+CTX组的抑瘤率分别为：53.82%、35.26%、71.42%、49.82%、78.89%。与模型组相比,CTX、黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖低剂量+CTX组、黄芪多糖高剂量组和黄芪多糖高剂量+CTX组均可以降低脾脏Gr-1+CD11b+髓样抑制细胞比例(P<0.01),此外CTX组、黄芪多糖低剂量、黄芪多糖低剂量+CTX、黄芪多糖高剂量和黄芪多糖高剂量+CTX组的荷瘤鼠脾脏中调节性T细胞比例显著下降(P<0.01),血清中IL-10、TGF-p和VEGF分泌水平也显著下降(P<0.01),同时,IFN-γ和TNF-α分泌水平显著提升(P<0.05,P<0.01)。
2.建立B16-F10荷瘤鼠模型,通过B16-F10荷瘤鼠的体重变化、脾指数和生化指标,观察黄芪多糖与CTX联合治疗对CTX的增效减毒作用。结果显示：造模后第六天,与正常组相比,CTX组体重下降(P<0.05),但黄芪多糖治疗组无显著差异；与CTX组相比,黄芪多糖低剂量和黄芪多糖高剂量组的荷瘤鼠的脾指数显著升高(P<0.01)；黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖低剂量+CTX组、黄芪多糖高剂量组和黄芪多糖高剂量+CTX组的血清中肌酐、尿素氮和谷丙转氨酶、谷草转氨酶都显著下降(P<0.05,P<0.01)。
