重组人Kallistatin蛋白的抗肝纤维化作用研究

肝纤维化（Hepatic Fibrosis，HF）是指肝内细胞外基质（Extracellular Matrix，ECM）合成增多降解减少，导致肝脏结缔组织异常增生的、可逆的病理过程。现阶段的抗HF药物普遍存在靶点单一、靶向性差的弊端，并且单一用药治疗HF的效果不佳。研发能针对多个靶点的抗HF新药或是寻求具有协同抗HF作用的药物组合，成为目前抗HF研究的新动向。本论文即选用Kallistatin这一兼具抗氧化、抗血管生成、舒张血管、抗炎活性的多功能分子来实现对HF的多靶点调控，并在小鼠体内检测其抗纤维化效果。 本论文用毕赤酵母摇瓶发酵法制备纯化重组人Kallistatin蛋白，摇瓶表达量高达14mg/L，最终得到的重组人Kallistatin蛋白分子量约为58kD，为下一步的动物实验研究提供了材料。 动物实验研究发现，重组人Kallistatin蛋白对CCl4致小鼠HF有明显的治疗作用，与模型组相比：①治疗组小鼠肝脏肝小叶结构趋于正常，几乎无肝细胞坏死及炎性细胞浸润，小鼠存活率均比模型组高。②治疗组小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达范围明显变小，表达程度显著降低。③治疗组小鼠肝功能指标谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）含量显著降低，白蛋白（ALB）含量显著升高。④治疗组小鼠纤维化血清指标透明质酸（HA）、Ⅲ型胶原（C-Ⅲ）、层粘连蛋白（LN）含量显著降低。⑤治疗组小鼠肝组织指标丙二醛（MDA）、羟脯氨酸（Hyp）含量显著降低，超氧化物歧化酶（SOD）含量显著升高。 本论文首次证明重组人Kallistatin蛋白对CCl4致HF小鼠肝内炎症、氧化应激、胶原合成等都有明显的抑制作用，这为Kallistatin通过多途径，抑制、逆转HF的研究提供了理论依据。