KYY01治疗抑郁症的药效学研究和机理探讨

抑郁症,是以情感障碍为突出表现的心理疾病,其发病较高,症状多样,如情绪低落、食欲和睡眠障碍、厌世观念和自杀观念等。中医认为,凡是由气机郁滞,脏腑功能失调所导致的心情抑郁,情绪不宁,胸部满闷,胁肋胀痛,或者易怒欲哭,自觉咽中有异物感等症状为临床表现的一类病证,称为郁病,即我们所说的抑郁症。据世界卫生组织统计,全球抑郁症的发病率约为3.1%,在发达国家更是接近6%,到2020年可能成为仅次于心脏病的第二大疾患。该病严重影响了患者的正常工作、学习与生活,使其无活适应于社会。因此,如何有效地治疗抑郁症已受到人们的广泛重视。 药物是治疗抑郁症的主要方法。传统抗抑郁药耐受性差、治疗指数窄,且合并用药时易发生相互作用,影响药效及病人依从性;新型抗抑郁药,如选择性5-羟色胺再摄取抑制剂相对副作用小、耐受性好,但价格却较为昂贵。中医药在抑郁症的治疗中发挥了越来越大的作用,越来越多的研究者将眼光投向资源丰富的中医药领域,致力于开发疗效明确、副作用小的治疗抑郁症的中药。 本课题受试药品KYY01,是由乌灵菌粉和贯叶连翘提取物按照一定的比例混合而成的中药制剂。贯叶连翘在欧美已经有很长的使用历史,近两个世纪以来,有关它治疗精神疾病的研究在不断进行,其开发应用在国际上引起了广泛关注,贯叶连翘提取物及其制剂在国内外均已投入临床使用,很多是当前的热门,具有广阔的开发前景。乌灵参菌粉具有明显调节中枢神经系统功能的作用,临床研究也表明连续服用乌灵菌粉能显著改善失眠、衰弱、焦虑、社交障碍等。本研究主要从KYY01治疗抑郁症的药效学和机理方面进行,以评价该药的抗抑郁作用以及初步探讨其治疗抑郁症的机制。 研究内容及结果如下: 本课题利用四类动物模型来评价KYY01治疗抑郁症的药效学和研究它治疗抑郁症的可能机制。首先在通过KYY01对小鼠行为绝望模型的影响,来判定它是否具有抗抑郁的作用;然后利用药物相互作用的关系,初步探讨KYY01这种抗抑郁作用的机制;接着在慢性应激大鼠和嗅球损毁大鼠这两个模型中,评价KYY01治疗抑郁症的药效,并通过这两个模型相关物质的检测来进一步探究该药抗抑郁的作用机制,其结果如下: 1 KYY01对小鼠行为绝望模型的影响 通过小鼠行为绝望模型,来观察药物是否能减少小鼠行为绝望所致的不动时间;同时,通过小鼠体重的比较和小鼠自主活动实验来判断药物是否具有中枢兴奋剂样作用,或是改变了小鼠的机体状态。 1.1小鼠强迫游泳实验 小鼠灌胃给药7天,于末次给药45min后,将小鼠单独放在局限性的圆柱形容器内游泳,适应2min后,观测其4min内的游泳不动时间。结果显示:阳性药和KYY01700mg/kg能有效缩短小鼠强迫游泳不动时间,与对正常照组相比较具有统计学意义（p＜0.05）。 1.2小鼠悬尾实验 小鼠灌胃给药7天,末次给药45min后,将小鼠尾端用胶布固定,使其呈倒悬状态,适应2min后,观测4min内小鼠不动时间,结果显示:阳性药和KYY01 350mg/kg能有效缩短小鼠悬尾不动时间,与正常对照组相比较具有统计学意义（p＜0.05）。 1.3小鼠体重和自主活动 小鼠灌胃给药7天。分别测量小鼠给药前后的体重,结果显示:各组小鼠之间没有统计学差异（p＞0.05）,KYY01对小鼠体重没有明显影响。 将小鼠放入小鼠自主活动仪中,适应2min后,观测4min内小鼠自主活动次数,结果显示:各组小鼠之间没有统计学差异（p＞0.05）,KYY01对小鼠自主活动没有明显影响。 小结: KYY01具有抗抑郁样作用,不具有中枢兴奋性,也不会改变机体机能状态。 2 KYY01对药物所致的抑郁模型的影响 此类模型利用药物间的相互作用关系,来初步探讨受试药物在抗抑郁时是否具有某种专一的神经化学作用。 2.1育亨宾毒性增强实验 通过对本实验中小鼠死亡数量的观测,来推测受试药物是否具有NE能神经活化作用,从而增强育亨宾的致死作用。 小鼠给药两次,末次给药后同时皮下注射亚致死量的育亨宾25mg/kg,观察18小时后各组小鼠的死亡数量。结果显示:各组均有小鼠死亡,与对照组相比较,KYY01各剂量组死亡的小鼠数量更多,但没有统计学上的差异（p＞0:05）。 2.2小鼠腹腔注射利血平 通过对利血平化小鼠行为的观察,来初步推测受试药物治疗抑郁症作用的机理。 小鼠腹腔注射利血平1h后,利血平组（模型组）小鼠出现体温下降,眼睑下垂和运动不能。结果显示:KYY01 350mg/kg组能有效对抗利血平所致的小鼠体温下降,与利血平组相比较p＜0.05:KYY01 700mg/kg组的眼睑下垂对抗百分率高于利血平组,虽然没有统计学差异,但是能看出有对抗眼睑下垂的趋势（p=0.055）;KYY01 350mg/kg组的运动不能对抗百分率高于利血平组,且有统计学上的差异（p＜0.05）,KYY01 700mg/kg组有对抗运动不能的趋势（p=0.055）。 2.3五羟色胺酸诱导的小鼠甩头行为 通过本实验,来观测受试药物对小鼠5-HT的影响,以推测其抗抑郁作用是否与此有关。 小鼠皮下注射帕吉林,45min后腹腔注射五羟色胺酸之后,小鼠出现甩头行为。结果显示:给药组小鼠甩头次数均多于对照组,KYY01 700mg/kg剂量组的小鼠甩头次数明显增加（p＜0.05）。 小结: 从这三个实验的结果,可以推测,KYY01抗抑郁样作用的机制主要是:阻断5-HT,NE和DA的重摄取和/或增强其传递,和/或抑制单胺氧化酶,从而提高5-HT,NE和DA的作用。但对NE和DA的作用,不如对5-HT的作用强。 3 KYY01对慢性应激抑郁症模型大鼠的影响 通过本模型,进一步研究受试药物的药效,并探讨其治疗抑郁症的机理。 大鼠在四周内受到包括冰水游泳、电击足底、昼夜颠倒在内的多种不同的应激刺激后,将会出现一系列情绪性的行为改变,比如兴趣减退,自发活动减少、学习记忆能力下降等。而这些应激动物接受抗抑郁治疗后可出现与正常动物同样的行为活动。 给予大鼠28天的慢性应激造模之后,进行行为学测试,并检测大鼠血液中的相关激素和海马中的神经递质。实验结果显示:与正常对照组相比,模型组大鼠蔗糖水偏嗜度降低;在敞箱中活动减少;Morris水迷宫实验中定位导航潜伏期增长,空间搜索时在第四象限的持续时间及路程缩短;血浆中的ACTH,Cort,CRH浓度升高;海马内的单胺类神经递质5-HT,NE和DA减少;这些变化均具有统计学意义（p＜0.05）。 阳性药能对抗模型组大鼠的这些变化,与模型组相比较具有统计学意义（p＜0.05）。 受试药KYY01各剂量均能增加蔗糖偏嗜度;KYY01 490mg/kg能增加大鼠在敞箱中的水平运动和站立次数;KYY01 490mg/kg和KYY01 245mg/kg能缩短Morris水迷宫中定位导航的潜伏期,KYY01 490mg/kg能增加空间搜索时在第四象限的持续时间和路程;KYY01 490mg/kg能降低血浆中ACTH,Cort,CRH的浓度,同时还能升高海马内单胺类神经递质NE,5-HT和DA的含量,减少DA的代谢;KYY01 245mg/kg能减少5-HT和DA的代谢。这些作用与模型组相比均具有统计学意义（p＜0.05）。 小结: 通过这个模型的实验可以推测,KYY01抗抑郁作用的机制可能是通过调节激素平衡来抑制HPA轴的过度活化,同时能增加脑内单胺类递质,抑制其代谢。 4 KYY01对嗅球损毁抑郁模型大鼠的影响 通过本模型,继续研究受试药物治疗抑郁症的药效,并探讨其机理。 大鼠级过嗅球损毁手术之后,行为学发生改变,包括自主活动增加、易激怒、被动回避反应能力欠缺和学习记忆能下降等,同时还伴有生理机能和内分泌上的变化。而这些嗅球损毁的大鼠经过抗抑郁治疗后,可以恢复和正常大鼠相同的行为活动。 给予大鼠嗅球损毁手术之后,持续给药三周,之后进行行为学测试,并检测海马中的相关物质。实验结果显示:与对照组和伪手术组相比,模型组大鼠在敞箱中水平运动及站立次数有所增加;Morris水迷宫中定位导航潜伏期增长,空间搜索时在第四象限的持续时间及路程缩短;海马中的5-HT1A受体的含量升高;这些变化均具有统计学意义（p＜0.05）。阳性药组能对抗模型组大鼠的这些变化,与模型组相比较具有统计学意义（p＜0.05）。 受试药KYY01 490mg/kg剂量能减少大鼠在敞箱中的活动;KYY01 490mg/kg剂量能缩短Morris水迷宫中定位导航的潜伏期,KYY01 490mg/kg和KYY01 123mg/kg剂量能增加空间搜索时在第四象限的持续时间和路程;KYY01三个剂量均能降低海马中的5-HT1A受体的含量和MAO的含量;这些作用与模型组相比均具有统计学意义（p＜0.05）。 小结: 这个模型的实验提示KYY01抗抑郁的机制可能是通过减少5-HT1A受体来影响5-HT系统,前且它可能还具有单胺氧化酶抑制作用。 结论: 通过研究,我们可以看到KYY01是可以治疗抑郁症的。我们用小鼠行为绝望模型来提示KYY01具有抗抑郁样作用,同时通过小鼠体重和自主活动的实验来排除其中枢兴奋性和长期给药对机体机能状态的改变性。利用药物间的相互作用可以进行初步推测,KYY01的抗抑郁作用是通过5-HT,NE和DA来实现的,并且5-HT是主要因素。最后,利用慢性应激大鼠模型和嗅球损毁大鼠模型的相关检测,并综合前面实验的结果,推测出KYY01的具体作用机制可能是:调节应激造成的机体促肾上腺皮质激素和皮质醇紊乱的状态,恢复其负反馈机制,抑制HPA轴的过度活化,减少对5-HT神经系统的损伤;具有单胺氧化酶抑制作用,提高脑内单胺类递质特别是5-HT的含量,抑制其代谢,从而增强单胺神经系统的活性,恢复脑内递质的平衡。从这些方面共同作用,达到治疗抑郁症的目的。