目的随着肠道菌群测序技术的发展,肠道菌群与疾病的关系也越来越被人们重视。糖尿病肾病作为糖尿病的慢性并发症之一,给个人与社会都带来很大的负担,中医中药对糖尿病肾病的治疗效果确切,得到广泛认同与肯定。有研究表明,糖尿病肾病患者的肠道菌群与正常健康人群的肠道菌群在组成与种类上存在一定差异.经过前期调查研究表明,糖尿病肾病湿热证型是糖尿病肾病早、中期最常见的一类证型,但造成湿热证的原因众说纷纭.本研究旨在通过探究糖尿病肾病湿热证型与非湿热证型的肠道菌群的组成与分布的差异,探讨糖尿病肾病湿热证型可能的形成原因.方法收集东直门医院肾病科糖尿病肾病的住院患者24例,其中湿热证12例,非湿热证12例,分别收集患者病情资料及肠道菌群标本,通过菌群DNA提取、PCR扩增、Miseq文库构建、Miseq上机测序过程后分别对两组肠道菌群标本进行分析.应用SPSS软件进行数据统计,性别年龄等一般资料采取T检验,肠道菌群分析采用OTU基础分析、Alpha多样性分析、物种组成分析、Beta多样性分析等分析方式,并对结果进行曼-惠特尼秩和检验(M-W检验)或Kruskal-Wallis秩和检验,假设检验以P<0.05为有统计学意义.结果本次测序共产生OTU 981个,其中湿热证组699个,非湿热证组838个。通过对两组样本进行OTU基础分析、Alpha多样性分析、物种组成分析、Beta多样性分析及统计学检验后得出结果:1.两组在OTU数目上不存在显著差异;2.两组在Chao 1指数、PD-Whole-tree指数、Shannon指数、Simpson指数等分析,两组在Alpha多样性上不存在显著差异;4.分析两组肠道菌群物种组成,并结合Kruskal-Wallis秩和检验后发现:两组在肠道菌群的组成上存在显著差异,具体表现为:湿热证组氨基酸球菌科(P=0.003),考拉杆菌属(P=0.014),活泼胃瘤球菌属(P=0.01),伊格尔滋氏菌属(P=0.042),半乳糖己酸菌属(P=0.024),Sellimonas菌属(P=0.037),Lactonifactor 菌属(P=0.014),Lachnoclostridium 菌属(P=0.033)等菌属增多;变形菌纲(P=0.014),弯曲菌目(P=0.014),普雷沃氏菌科(P=0.003),乳杆菌科(P=0.004),巴斯德菌科(P=0.042),微球菌科(P=0.037),弯曲菌科(P=0.014),普雷沃氏菌属-9(P=0.018),粪杆菌属(P=0.021),乳杆菌属(P=0.003),萨特菌属(P=0.04),嗜血杆菌属(P=0.042),乳酸乳球菌属(P=0.046),肠杆菌属(P=0.033),明串珠菌属(P=0.033),罗斯氏菌属(P=0.037),弯曲杆菌属(P=0.032),Senegalimassilia 菌属(P=0.015),Pasteurellales 菌目(P=0.042)等菌属减少;5.经过 Spearman 相关性分析后可知,由湿热之邪导致差异的菌群为变形菌纲、弯曲菌目、普雷沃氏菌科、氨基酸球菌科、弯曲菌科、普雷沃氏菌属-9、粪杆菌属、Lachnoclostridium菌属、考拉杆菌属、活泼瘤胃球菌属、瘤胃菌属-UCG-003、Senegalimassilia菌属。其中普雷沃氏菌科属于强相关(|ρ|=0.619)其余菌群属于中等程度相关。结论1.通过对糖尿病肾脏病湿热证与非湿热证患者的肠道菌群的测序分析,并结合Kruskal-allis秩和检验可知,湿热组与非湿热组在某些菌群的组成上具有明显差异。2.结合Spearman相关系数可知,在有差异的菌群中,与湿热之邪有关的菌群为变形菌纲、弯曲菌目、普雷沃氏菌科、氨基酸球菌科、弯曲菌科、普雷沃氏菌属-9、粪杆菌属、Lachnoclostridium菌属、考拉杆菌属、活泼瘤胃球菌属、瘤胃菌属-UCG-003及Senegalimassilia菌属,可能是由于湿热之邪导致这些菌群的含量发生变化,从而产生一派湿热症状。
