[摘要]目的：探究内质网应激在抑郁障碍后脑供血不足的发病机制,分析比较草酸艾司西酞普兰(Escitalopram)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine NAC)、美托洛尔(Metoprolol)对内质网应激凋亡通路相关基因表达的调控作用。方法：成年健康雄性SD大鼠(n=45,250±20g),随机分为5组(9只/组)分别为对照组,抑郁模型组,抑郁模型+草酸艾司西酞普兰组(10mg/kg/d),抑郁模型+N-乙酰半胱氨酸组(125mg/kg/d),抑郁模型+美托洛尔组(10mg/kg/d),除对照组外,同时对其余4组大鼠进行慢性轻度不可预见性刺激,刺激的同时不同药物组同时腹腔注入相应的药物共4周,造模结束后进行敞箱实验和糖水偏好实验确定大鼠的抑郁状态。透射电镜观察海马皮质神经细胞微观结构,流式细胞术AnnexinV-PI双标染色法检测各组大鼠脑组织凋亡情况;采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法及硝酸盐还原酶法检测各组大鼠脑组织海马以及额叶皮质一氧化氮(NO)浓度、一氧化氮合酶(NOS)活性以及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)浓度;使用免疫印迹法(Wb)检测脑组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS-ser1179)、抗葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、CCAA T/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)的蛋白表达量。荧光实时定量聚合酶链反应(rt-PCR)检测eNOS、GRP78、CHOP、Caspase-12 的 mRNA相对表达量。结果：1.与对照组比较,抑郁组体重、敞箱实验得分、糖水偏好得分均显著减少。与抑郁组比较,美托洛尔组、NAC组,草酸艾司西酞普兰组敞箱实验和糖水偏好实验得分增加(P<0.05)。2.透射电镜显示与对照组比较,抑郁组和美托洛尔组大鼠神经细胞核肿胀、膜结构模糊,血管内皮细胞肿胀,毛细血管狭窄。与抑郁组比较,艾司西酞普兰组细胞肿胀较轻微,血管内皮细胞损伤较轻。3.流式细胞结果显示凋亡率：与对照组[海马(25.5±3.5)%、皮质(24.1±8.6)%]比较,抑郁组[海马(42.9±3.8)%、皮质(44.8±5.6)%]凋亡率明显升高。NAC组[海马(42.9±3.8)%、皮质(44.8±5.6)%]与草酸艾司西酞普兰组[海马(33.3±4.3)%、皮质(30±1.5)%]比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.酶标仪检测：与对照组比较,抑郁组NOS活性增高,NO、MDA浓度升高,SOD活性降低。与抑郁组比较,艾斯西酞普兰组、美托洛尔组和NAC组的NOS活性降低,NO、MDA浓度降低,SOD活性升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.rt-PCR检测结果分析：与对照组比较,抑郁组海马与皮质eNOS mRNA相对表达量下调,Caspase12、GRP78、CHOP mRNA相对表达量上调(P<0.05)。与抑郁模型组比较,NAC组和艾司西酞普兰组海马与皮质eNOS表达升高,Caspase12、GRP78、CHOP mRNA相对表达量降低(P<0.05)。6.免疫印迹法(Wb)结果分析：与对照组比较,抑郁组海马eNOS和eNOS-ser1179蛋白相对表达量降低,Caspase12、GRP78、CHOP相对表达量升高(P<0.05)。与抑郁组比较,NAC组和草酸艾司西酞普兰组海马eNOS和eNOS-ser1179蛋白相对表达量升高,Caspase12、GRP78、CHOP蛋白相对表达降低(P<0.05)。结论：1.抑郁组大鼠行为学得分与体重降低,美托洛尔、NAC、艾司西酞普兰可改善大鼠抑郁行为。2.抑郁症大鼠海马与皮质细胞凋亡率增加,NAC与艾司西酞普兰能减少大鼠细胞凋亡率,美托洛尔抗凋亡作用不明显。3.电镜下观察抑郁症大鼠神经细胞和毛细血管破坏,NAC与艾司西酞普兰改善大鼠神经细胞肿胀和毛细血管破坏,美托洛尔改善效果不佳。4.抑郁症大鼠脑组织中氧化应激指标MDA、NO浓度和NOS活性升高,抗氧化物SOD活性降低,美托洛尔、NAC和艾司西酞普兰可降低大鼠MDA、MO、NOS,升高SOD活性。5.抑郁症大鼠脑组织中eNOS的蛋白与mRNA表达量降低,内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase12和CHOP的蛋白与mRNA相对表达量升高,美托洛尔、NAC与艾司西酞普兰能增加eNOS的蛋白与mRNA的表达,NAC与艾司西酞普兰能可降低脑组织中GRP78、Caspase12和CHOP的蛋白与mRNA的表达量。
