茵陈蒿汤网络药理学与药效物质基础研究

茵陈蒿汤出自东汉张仲景的《伤寒论》,由茵陈、栀子、大黄三味药材组成,是临床治疗湿热黄疸的名方。现代药理学研究表明,茵陈蒿汤也具有治疗肝损伤、肝纤维化等保肝作用。然而,目前对于茵陈蒿汤化学物质基础和保肝作用机理的研究尚不全面。本课题以茵陈蒿汤化学物质组研究为基础,进行网络药理学研究,初步探讨其保肝作用机制,并在网络药理学结果的指导下开展相关药材活性成分的体外、体内定量研究。本文的研究内容主要分为以下四个部分:一、茵陈蒿汤化学成分的快速鉴别:UHPLC-Q-TOF/MS是一种灵敏度高、定性能力强的液质联用技术,可在较短时间内对复杂体系进行快速分离和鉴定。本研究将这项技术应用于茵陈蒿汤水煎液中化学成分的快速鉴别。实验中采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液系统梯度洗脱,分别在正、负离子模式下采集质谱信息,对照已建立的茵陈蒿汤化学成分库进行数据分析,共鉴别得到茵陈蒿汤中140种化学成分,为下一步网络药理学研究奠定基础。二、基于网络药理学的茵陈蒿汤“成分-靶标”相互作用网络分析:本研究首先通过化学物质组学和文本挖掘方法,从茵陈蒿汤中筛选了18个代表性的保肝活性成分。然后,应用HTDocking Anti-Liver Fibrosis平台对这些化合物的潜在靶标进行预测,得到成分-靶标对信息。最后,采用可视化软件Cytoscape构建茵陈蒿汤保肝作用的“成分-靶标”相互作用网络,推测茵陈蒿汤主要通过抑制肝星状细胞的增殖和活化、抗氧化应激等方式发挥保肝作用。三、茵陈蒿汤的体外定量分析:大量研究表明茵陈蒿汤中的滨蒿内酯、儿茶素、绿原酸、东莨菪内酯、金丝桃苷、秦皮乙素、京尼平苷、槲皮素、京尼平、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素和大黄素甲醚均有保肝的功效。本研究采用HPLC-DAD技术,应用Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱进行分离,乙腈-0.1%磷酸水溶液系统梯度洗脱,对茵陈蒿汤中14种化学成分进行含量测定。3批茵陈蒿汤中滨蒿内酯、儿茶素、绿原酸、东莨菪内酯、金丝桃苷、秦皮乙素、京尼平苷、槲皮素、京尼平、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚14个成分的含量测定结果分别为0.136～0.168、0.080～0.104、0.403～0.470、0.008～0.009、0.061～0.068、0.020～0.027、0.269～0.306、0.036～0.048、0.005～0.006、0.122～0.164、0.037～0.044、0.030～0.037、0.011～0.014、0.007～0.010 mg·g-1。本章建立了一种便捷、通用的定量分析方法,可用于不同批次茵陈蒿汤的含量测定和质量控制研究。四、茵陈蒿汤中8种成分在正常与急性肝损伤大鼠体内的药动学比较研究:中药复方口服给药后,血浆中有效成分的含量与治疗效果有直接关系,且疾病状态对药物的体内过程有显著影响。本研究基于UHPLC-MS/MS技术,建立了一种单次灌胃给药茵陈蒿汤后,大鼠血浆中滨蒿内酯、东莨菪内酯、京尼平苷、大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚8种成分的含量测定方法,并将这种方法应用于正常和急性肝损伤大鼠灌胃给药茵陈蒿汤后的比较药动学研究。研究结果表明,疾病状态影响滨蒿内酯、京尼平苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚的体内过程,对东莨菪内酯和大黄素没有显著影响。此研究为日后茵陈蒿汤的临床安全、合理用药提供一定的参考。综上所述,本研究在明确了茵陈蒿汤的化学物质基础上,通过网络药理学构建“成分-靶标”网络,阐释茵陈蒿汤保肝作用机制。进一步采用HPLC-DAD方法对茵陈蒿汤中具有保肝作用的14个化合物进行体外定量研究,并建立了进入大鼠血浆中的8种成分的定量方法。通过构建急性肝损伤模型大鼠,比较研究茵陈蒿汤在正常和疾病大鼠体内药动学行为,说明药物体内过程会受到肝损伤疾病的影响。本研究为茵陈蒿汤的质量控制和临床合理用药提供了参考,也为中药复方现代化研究提供了新的思路。