基于VEGF-C/PI3K/AKT信号通路研究白花蛇舌草抑制大肠癌淋巴管新生的作用机制

目的:通过观察白花蛇舌草(HDW)对大肠癌转移及VEGF-C表达的影响,并基于VEGF-C介导的PI3K/AKT信号通路调控探讨HDW对淋巴管内皮细胞淋巴管新生的影响,以期阐明HDW抑制大肠癌淋巴管新生及其转移的分子机制,为其临床治疗肿瘤奠定实验基础。方法:(1)采用乙醇回流提取方法制备白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDW),并体外干预培养的人大肠癌细胞株HCT116、HCT-8,采用MTT法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,划痕实验及Transwell实验观察细胞迁移能力,Western Blot检测VEGF-C蛋白表达;(2)人淋巴管内皮细胞(HLEC)经EEHDW干预后,采用MTT法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞存活能力,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡,Transwell实验观察细胞迁移,Tube formation检测淋巴管腔形成;(3)进一步用外源性VEGF-C刺激HLEC后,再加入EEHDW进行干预,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Transwell实验观察细胞迁移,Tube formation检测淋巴管腔形成,Western Blot 检测 p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、VEGFR-3、MMP-2、MMP-9等蛋白表达。结果:(1)EEHDW能显著抑制HCT116、HCT-8的细胞活力、集落形成能力及迁移能力,显著下调VEGF-C的蛋白表达;(2)EEHDW能降低HLEC的细胞活力、集落形成能力、迁移能力及管腔形成能力,对细胞周期及细胞凋亡无明显影响;(3)外源性VEGF-C刺激可增加HLEC的细胞活力和集落形成能力,增强细胞的迁移能力及管腔形成能力,EEHDW干预可显著抑制经VEGF-C上调的细胞活力、存活能力、迁移能力及管腔形成能力;外源性VEGF-C刺激及EEHDW干预对细胞周期及细胞凋亡均无明显影响;VEGF-C可上调HLEC的p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、VEGFR-3、MMP-2、MMP-9 的表达,EEHDW 干预后可下调上述蛋白表达。结论:EEHDW具有抑制大肠癌细胞转移和VEGF-C表达的作用,能抑制大肠癌细胞生长、迁移和淋巴管内皮细胞的生长、迁移及管腔形成能力;且EEHDW能够抑制VEGF-C介导的PI3K/AKT通路活化。这可能是EEHDW抑制大肠癌淋巴管新生的重要作用机制之一。