黄芪提取物干预食管癌细胞Ec9706/cDDP GST-π的研究

目的：食管恶性肿瘤的发病率较高，在现有的治疗手段中，手术治疗和放射治疗是疾病初期常用的，预后较好的治疗方法，然而大多数病例在确诊时已属于是终末期，没有了手术治疗和放射治疗的指证，所以化学药物治疗占有着十分重要的意义。但是这一疗法往往出现耐药，不利于病人的疗效和远期的预后。 生物体内的代谢解毒酶：谷胱甘肽转移酶(GST-π)是在自然界中广泛存在于生物体内的一种生物的化学反应的加速剂。在谷胱甘肽上可与巯基以及有电子极性的物质结合，导致新生成的物质亲水性较原来提高，从而使其在水中溶解度加大，易于从体内排出。谷胱甘肽转移酶属于体内催化剂的一种。细胞通过这种酶的催化作用，可以将有毒物质变的对细胞没有毒性作用。到目前为止，许多恶性肿瘤产生原发性或继发性耐药机理的研究都与GST-π相关。 黄芪为豆科植物，入药的部位为其根部。有固护卫表、补益中气，消除水肿的功效。可用于恶性肿瘤的治疗，近些年的研究表明，由黄芪组成的方药在体外对不同的恶变细胞均有延缓增殖的作用，其药理作用以及临床经验被临床医生所重视。本项目用Ec9706/cDDP细胞系做为研究的对象，运用可以量化的指标，来观察黄芪的提取物是否可以通过减少耐顺铂的食管恶性肿瘤细胞的谷胱甘肽还原酶的表达，来达到减少细胞耐药的目的，为祖国医学的传统疗法提供现代科学依据。 方法：1、在含0.5ug/ml顺铂的RPMI-1640培养基中培养Ec9706/cDDP的细胞；用MTT的方法来检测黄芪提取物的细胞的毒性作用，找到无毒的浓度进行细胞的逆转的耐药试验；用MTT的方法来检测Ec9706/cDDP中添加与不添加黄芪提取物（AE）培养48h后细胞存活率的高低，用线性回归处理两组数据，算出不同的半数的抑制的浓度(IC50)差异，计算出逆转的倍数等于对照组IC50/试验组IC50。2、将不同的细胞系分为实验和对照两组，实验组用黄芪的提取物进行干预，对照组加入细胞培养液，用RT-PCR的方法来检测两组细胞的GST-π的表达。3、采用SPSS13.0对所得的实验数值进行处理，以x±S表示，用直线回归计算IC50，不同组数据间的比较，采用t检验。 结果：1、黄芪提取物对Ec9706/cDDP的细胞的细胞毒作用与黄芪提取物的浓度有关。浓度为分别为1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml组与对照组的抑制率在统计学上无差异，黄芪提取物浓度为100ug/ml，1mg/ml组间的抑制率不同分别表示为18.4%，29.8%相比较对照组有统计学意义。所以选则无毒黄芪提取物浓度为10ug/ml为逆转的实验用浓度。2、顺铂的单独作用，顺铂对Ec9706/cDDP的IC50浓度为43.59ug/ml，顺铂与无细胞毒性剂量10ug/ml的黄芪提取物共同作用，DDP对Ec9706/cDDP的IC50的浓度降低至26.27ug/ml，逆转倍数为1.66。3、于A组10个样本中，8个GST-π基因呈高表达水平，2个为低表达水平；B组10个样本中，1个GST-π基因呈高表达水平，9个为低表达水平。用统计学的方法将两组数据处理后可以得知，A、B两组样本的GST-π基因的表达在统计学的角度来说存在差异（P<0.05）。 结论：黄芪提取物可逆转在实验条件下Ec9706/cDDP细胞株对顺铂耐药的表现，逆转效果与剂量呈相关性，其机制可能与GST-π基因表达降低有相关性。