抗结核药物性肝损伤患者体质分布及其与ABC转运蛋白SNP相关性研究

背景:抗结核药物性肝损伤（ATDILI）是临床上最常见且最严重的的药物不良反应之一,也是我国最主要的药物性肝损伤之一,其发生率高达30%以上。重者可导致肝衰竭甚至死亡,明确易感危险因素对早期发现和防治ATDILI具有重要意义。中医学认为,体质状态决定疾病的发病易感性,并对疾病预后转归、指导诊断防治具有重要价值。ABC转运蛋白是重要的III相药物转运蛋白,其遗传多态性可导致药效学、药代动力学改变。从ATDILI中医体质、遗传易感因素角度寻找规律,探索ATDILI发病易感体质及其可能的宿主遗传机制,对揭示中医体质内涵,并在临床诊疗和疾病防治中发挥中医优势提供科学理论参考具有重要意义。目的:①了解ABC转运蛋白单核苷酸基因多态性（SNP）与ATDILI的相关性,探讨ATDILI发病的易感遗传因素;②了解ATDILI患者中医体质分布情况,并分析其发病易感体质,从中医体质角度揭示ATDILI易感性;③探讨ATDILI易感体质与易感ABC转运蛋白SNP相关性,以期揭示ATDILI易感体质可能的宿主遗传机制。方法:本研究采用病例-对照研究,研究对象共纳入643例患者,其中服用抗结核药物出现肝损的患者289例（ATDILI组）,服用抗结核药物未出现肝损的患者354例（non-ATDILI组）。收集整理患者的病例信息、临床检测指标及血标本,对血标本进行DNA提取,筛选ABC转运蛋白SNP检测位点;采用Sequenom MassARRAY质谱技术对所有研究对象ABC转运蛋白64个位点SNP进行检测;选择符合Hardy-Weinberg遗传平衡的51个位点进行统计分析。采用卡方检验、多元Logistic回归分析、Haploview等对各位点等位基因、基因型、遗传模型、LD连锁不平衡检测及单倍体型与ATDILI的相关性进行分析,筛查ATDILI易感SNP位点。以王琦教授9种体质分型标准为依据,对两组人群体质分布进行调查,采用卡方检验、Kruskal Wallis秩和检验、多元Logistic回归分析等方法分析ATDILI主要体质及兼夹体质分布特点,并分层分析ATDILI易感体质临床特点。采用多元Logistic回归分析对ATDILI易感体质与易感SNP位点进行关联分析;2×4叉生分析法分析体质-基因交互作用对ATDILI的影响。结果:1.ABCB1基因rs28656907（T>C）位点CC基因型患者ATDILI发病风险降低0.58倍（OR=0.58,95%CI:0.36-0.93,P<0.05）,显性和加性遗传模型均是其保护遗传模型。分层分析显示:该位点位TC和CC基因型是肝生化检查异常型ATDILI的保护因素（TC基因型:OR=0.57,95%CI:0.35-0.93,P<0.05;CC基因型:OR=0.48,95%CI:0.23-0.97,P<0.05）,加性和显性遗传模型均是肝生化检查异常型肝损的保护遗传模型（加性:OR=0.48,95%CI:0.23-0.99,P<0.05;显性:OR=0.54,95%CI:0.34-0.86,P<0.01）。单倍型分析显示:ABCB1 基因中rs4148727（A>G）-rs28656907（T>C）-rs10261685（A>C）位点构成的单倍体中,ACA单倍型携带者ATDILI发病风险降低（OR=0.77,95%CI:0.56-0.98,P<0.05）,而ATA单倍型携带者ATDILI发病风险增加（OR=1.34,95%CI:1.07-1.83,P<0.01）。2.ABCB4基因rs2071645（G>C）位点隐性遗传模型下ATDILI发病风险降低（OR=0.50,95%CI:0.25-0.98,P<0.05）,但等位基因、基因型和ATDILI亚型分层分析均未发现其与ATDILI相关性,该结果有待进一步验证。3.ABCB11基因rs3829888（A>G）位点AG和GG基因型是ATDILI易感风险基因型（AG 基因型:OR=1.97,95%CI:1.25-3.12,P<0.01;GG 基因型:OR=8.67,95%CI=1.02-73.54,P<0.05）,加性和显性遗传模型均为ATDILI风险遗传模型;分层分析显示:该位点AG基因型是肝细胞损伤型、胆汁淤积型和混合型三种亚型ATDILI发病的风险基因型（肝细胞损伤型:OR=2.15,95%CI:1.19-3.91,P<0.05;胆汁淤积型:OR=2.09,95%CI:1.14-3.83,P<0.05;混合型:OR=3.77,95%CI:1.92-7.39,P<0.001）,GG基因型是胆汁淤积型ATDILI的极高风险基因型,（OR=29.20,95%CI:3.08-276.67,P<0.01）;显性遗传模型均是三种亚型ATDILI发病遗传模型（肝细胞损伤型:OR=2.15,95%CI:1.19-3.88,P<0.05;胆汁淤积型:OR=2.70,95%CI:1.22-5.97,P<0.05;混合型:OR=3.90,95%CI:2.01-7.56,P<0.001）;加性和隐性遗传模型是胆汁淤积型ATDILI极高风险遗传模型（加性:OR=27.96,95%CI:2.83-276.74,P<0.01;隐性:OR=26.87,95%CI:2.85-253.17,P<0.01）。ABCB11基因rs2216504（C>T）位点CT基因型患者ATDILI的发病风险增加1.67倍（OR=1.67,95%CI:1.02-2.73,P<0.05）,显性模型是ATDILI发病风险遗传模型（OR=1.63,95%CI:1.01-2.64,P<0.05）,分层分析显示:该位点CT基因型患者混合型ATDILI发病风险增加2.40倍（OR=2.40,95%CI:1.13-5.09,P<0.05）;显性遗传模型是混合型ATDILI发病风险遗传模型（OR=2.38,95%CI:1.15-4.92,P=0.019）。单倍型分析显示:ABCB11 基因rs10930343（AAA>DEL）-rs3829888（A>G）-rs3814382（G>A）-rs3814381（C>T）-rs2216504（C>T）-rs4148765（C>T）位点构成的单倍体中AAAGGCTC 单倍型 ATDILI 发病风险增加 1.71 倍（OR=1.71,95%CI:1.09-3.25,P=0.025）。4.ABCG8基因rs4148211（G>A）位点GA基因型携带者ATDILI发病风险增加1.70倍（OR=1.70,95%CI:1.14-2.53,P<0.01）;显性遗传模型是其风险遗传模型（OR=1.55,95%CI:1.05-2.27,P=0.026）。层分析显示,该位点GA基因型患者胆汁淤积型DILI发病风险增加3.15倍（OR=3.15,95%CI:1.56-6.35,P=0.001）,混合型DILI发病风险增加2.87倍（OR=2.87,95%CI:1.52-5.41,P<0.01）;显性遗传模型是胆汁淤积型和混合型ATDILI发病的危险因素（胆汁淤积型:OR=2.75,95%CI:1.38-5.51,P<0.01;混合型:OR=2.52,95%CI:1.35-4.70,P<0.01）。5.未发现ABCC2、ABCC4、ABCC10和ABCG2基因多态性与ATDILI相关性（P>0.05）。6.ATDILI患者主要体质分布分析显示:ATDILI患者主要体质分布以气虚质（25.95%）,湿热质（20.76%）,阴虚质（18.69%）和痰湿质（14.88%）为主;与非ATDILI组对比,ATDILI组平和质比例明显降低,而气虚质和湿热质分布比例明显增加,均具有显著统计学差异（P<0.01）;多元Logistic回归分析显示,湿热质患者ATDILI发病风险增加1.93倍（OR=1.93,95%CI:1.25-2.97）,气虚质患者ATDILI发病风险增加2.1倍（OR=2.10,95%CI:1.40-3.15）,而平和质是ATDILI发生风险的强保护因素（OR=0.21,95%CI:0.10-0.41）,均具有显著统计学意义（P<0.01）。7.ATDILI患者兼夹体质分布分析显示:ATDILI患者73.36%存在兼夹偏颇体质,明显高于非ATDILI患者（P<0.01）,气虚质、湿热质、阴虚质和痰湿质占ATDILI患者的80.27%,这四种高频体质的兼夹气郁质比例在ATDILI患者中均明显升高（P<0.05）,占这四种高频体质的21.12%（49:232）,为ATDILI的易感兼夹体质。8.ATDILI患者易感体质临床特点分析显示:ATDILI患者中气虚质患者分布比例与年龄、发病潜伏期呈正向相关性,血TP水平较兼夹气郁质患者降低,TBA水平较湿热质患者升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）;湿热质患者主要分布在30岁以下人群或中重度肝损伤人群（P<0.05）,且其分布比例与病程呈负相关性（P<0.05）,湿热质患者血ESR、CRP水平均较兼夹气郁质患者明显升高（P<0.05）;兼夹气郁质患者中重度肝损伤人群分布比例明显增加（P<0.01）,其血TBA水平明显高于湿热质患者,ALT水平明显高于湿热质和气虚质患者,差异均具有统计学意义（P<0.05）。9.ABCB11rs3829888位点加性遗传模型携带者发生气虚质ATDILI风险增加2.29倍（OR=2.29,95%CI:1.23-4.28,P<0.01）,ABCG8rs4148211 位点加性遗传模型携带者发生气虚质ATDILI风险增加2.37倍（OR=2.37,95%CI:1.34-4.18 P<0.01）;ABCB11rs2216504（C>T）位点加性遗传模型携带者发生湿热质ATDILI风险增加2倍（OR=2.00,95%CI:1.03-2.89,P<0.05）。另外,并未发现平和质和兼夹气郁质与ABC转运蛋白SNP位点相关性（P>0.05）。10.平和质与ABCB1rs28656907位点存在基于相加模型存在负向交互作用（RERI=0.55,S<1,P<0.01）,平和质携带ABCB1rs28656907位点加性遗传模型的患者ATDILI发病风险降低0.23倍（95%CI:0.100-0.536）;此外,气虚质、湿热质和兼夹气郁质均与ABC转运蛋白易感SNP位点无交互作用（P>0.05）。结论:1.ABCB1基因rs28656907（T>C）位点SNP可能是ATDILI的易感保护因素;ABCB4基因rs2071645（G>C）位点仅在隐性遗传模型下ATDILI发病风险降低,结果有待验证;2.ABCB11 基因rs3829888（A>G）、rs2216504（C>T）位点和ABCG8基因rs4148211（G>A）位点SNP可能是ATDILI的易感危险因素。3.未发现ABCC2、ABCC4、ABCC10和ABCG2基因多态性与ATDILI相关性。4.ATDILI组主要体质分布以气虚质、湿热质、阴虚质和痰湿质为主,其中气虚质、湿热质兼夹气郁质为ATDILI易感危险体质,平和质为ATDILI易感保护体质。5.ATDILI组患者易感体质临床特点:气虚质患者多为中老年患者,相对发病缓慢,血TP水平较低、TBA水平较高;湿热质患者多为青年,相对病程较短、中重度肝损比例较高,血ESR、CRP水平相对较高;兼夹气郁质患者中重度肝损比例较高,血TBA、ALT水平相对较高。6.ABCB11rs3829888（A>G）位点和ABCG8rs4148211（G>A）位点SNP可能是气虚质ATDILI的易感危险因素;ABCB11rs2216504（C>T）位点SNP可能是湿热质ATDILI的易感危险因素。7.平和质与ABCB1rs28656907位点SNP存在负向交互作用,平和质携带ABCB1rs28656907位点加性遗传模型者ATDILI发病风险降低。