马鹿茸血酶解制备抗疲劳活性肽的研究

本文以天山马鹿茸血为原料,通过两种蛋白酶水解,制备抗疲劳肽;并通过小鼠负重游泳实验研究产物肽的抗疲劳和抗氧化活性;在此基础上,采用反相高效液相色谱测定抗疲劳活性高的产物肽相对分子质量分布,用Sephadex G-15将此水解产物进行分离;进一步对分离组分进行抗疲劳和抗氧化活性鉴定,并探讨其抗疲劳机制。 首先对鹿茸血进行酶解。通过比较木瓜和中性蛋白酶水解产物的水解度和体外抗氧化效果,确定木瓜蛋白酶对鹿茸血蛋白进行水解,并确定的最佳水解条件为:温度52℃;pH为7.4;E/S为12677U/g底物;[S]为8%,水解度最高为19.8%。 选取三种不同水解度的水解产物以及原鹿茸血和鹿茸粉,以150mg/kg·d灌胃15天,进行小鼠负重游泳实验。结果表明:水解度(DH)为19.8%的水解产物(命名为肽1)使小鼠的游泳时间为250min,与空白对照组相比,游泳时间明显延长。在相同的游泳时间内,肽1组肌乳酸含量比对照组减少44.9%,肝糖元的消耗量减少38.4%,血液中尿素氮含量减少了31.4%。而且与对照组相比,肽1组显著增强小鼠血清、肝组织的总抗氧化能力和GSH-pX的活力,减少了MDA的含量,具有明显的抗氧化活性。与鹿茸粉和原鹿茸血粉相比,肽1组的抗疲劳和抗氧化性明显增强。最终选取抗疲劳活性和抗氧化活性最好的肽1进行下一步试验。 选用Sephadex G-15(1.8×60 cm)柱对水解产物肽1进行分离,最终确定的分离条件。用凝胶高效液相色谱(HPLC)测定肽1的相对分子质量分布为272～550之间。水解产物中必需氨基酸含量为55.34%,支链氨基酸为21.90%,具有很高的营养价值。对肽1分离得到的五个峰样品进行小鼠体内的抗疲劳和抗氧化活性测定,最终确定组分峰1、2抗疲劳活活性最高。