黄芪甲苷对心肌成纤维细胞CTGF、FN表达影响及机制研究

目的:研究黄芪甲苷对心肌成纤维细胞CTGF、FN表达的影响,探究黄芪甲苷抑制心肌纤维化的分子机制,为黄芪甲苷的临床应用提供理论依据。方法:新生Wistar大鼠若干只,取心脏,采用差速贴壁法提取心肌成纤维细胞,将第二代心肌成纤维细胞进行后续实验。MTT法选出最佳药物干预浓度;根据实验分组的不同进行对应干预,空白组:不添加任何干预;空载体组:为空质粒载体;sh-CTGF组;黄芪甲苷组;TGF-β1组、sh-CTGF+TGF-β1组、TGF-β1+黄芪甲苷组、sh-CTGF+黄芪甲苷组。根据心肌成纤维细胞表面特异性抗原Vimtin进行免疫荧光鉴定,将干预后的细胞提取RNA和蛋白分别行RT-PCR、Western blot检测CTGF及FN mRNA及蛋白的表达情况。结果:1.提取的心肌成纤维细胞呈梭形、菱形、多边形等不同形状,细胞阳性率>95%。2.空白组与空载体组mRNA的表达无统计学意义,提示空载体对基因的表达无影响。3.空载体组、sh-CTGF组CTGF、FN mRNA的表达有统计学意义,提示转染成功,干预有效。4.空白组、TGF-β1组CTGF、FN mRNA的表达有统计学意义,TGF-β1可刺激心肌成纤维细胞CTGF、FN mRNA的表达。5.sh-CTGF组、sh-CTGF+TGF-β1组CTGF、FN mRNA表达有统计学意义,提示TGF-β1可刺激sh-CTGF干预后心肌成纤维细胞CTGF、FN mRNA的表达。6.空白组、黄芪甲苷组CTGF、FN mRNA表达有统计学意义,提示黄芪甲苷抑制心肌成纤维细胞CTGF、FN mRNA的表达。7.通过对sh-CTGF组、sh-CTGF+黄芪甲苷组CTGF、FN mRNA表达有统计学意义,提示黄芪甲苷进一步抑制sh-CTGF干预后的心肌成纤维细胞CTGF、FN mRNA的表达。结论:1.黄芪甲苷可降低心肌成纤维细胞CTGF、FN的表达。2.TGF-β1可刺激心肌成纤维细胞CTGF、FN的表达。3.心肌成纤维细胞CTGF与FN的表达呈正相关。4.黄芪甲苷可能是通过抑制TGF-β-smads而对下游因子CTGF、FN的表达起到抑制作用。5.黄芪甲苷可能是通过降低心肌成纤维细胞CTGF表达而降低心肌成纤维细胞FN的表达,抑制心肌纤维化,改善心肌重塑,发挥心脏保护作用。