细胞间隙连接通讯与子宫内膜异位种植

目的:探索一种获得高产量、高纯度子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的分离培养方法,建立子宫内膜异位症体外细胞模型。 方法:通过高浓度Serva胶原酶NB4和DNaseⅠ联合消化、过滤及贴壁纯化等技术,分离培养30例子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞,并拟传代。 结果:29例标本培养成功,每1g子宫内膜组织约可分别得到(40～50)×106个腺上皮细胞和(40～50)×106个间质细胞,细胞产量高。并且腺上皮细胞纯度率约96%,间质细胞纯度率达98%以上。间质细胞可以有限传代,腺上皮细胞不能传代。 结论:通过改良步骤,可提高细胞尤其是间质细胞产量,同时保证了其纯度及活性,不失为一种较理想的子宫内膜细胞分离培养方法,为探索子宫内膜异位症的发病机制提供了良好的体外实验模型。 目的:为子宫内膜异位症的各项研究提供实验动物模型。 方法:选择6～8周龄的雌性裸鼠,收集人在位子宫内膜种植于裸鼠腹腔,分别于种植后第5天、第15天、第30天断颈处死裸鼠,观察子宫内膜种植生长情况和组织形态学变化。对照组:同法置入人大网膜。 结果:种植成功率可达100%。种植后第5天见移植内膜与裸鼠盆、腹腔组织牢固粘附。光镜下见种植物与鼠间皮之间已出现新生的血管网,可见腺体,周围围绕着间质细胞。种植后第15天见病灶与裸鼠组织呈融合状态,周围有血管生长,病灶呈实质性或囊肿样。光镜下见明显的子宫内膜腺体和间质,血液供应丰富。种植后第30天病灶萎缩变小,局部粘连较重。光镜下见纤维化严重,腺细胞不完整。对照组植人的大网膜组织部分粘连于腹壁切口,其余游离存在,并逐渐萎缩、吸收。光镜下除炎性反应外,大网膜组织结构无改变。 结论:采用人在位子宫内膜构建裸鼠内异症在体模型,移植后的内膜组织仍保持原有的组织形态和生化特征,便于对子宫内膜细胞增殖、新血管形成、激素和免疫应答等机理进行充分的分析和研究。此模型性状显著且稳定,费用低、操作简单、观察周期短,是一种较理想的内异症在体模型。 目的:通过内异症在体模型,系统、完整地研究雌、孕激素对内异症异位内膜组织中CX26、CX32、CX43基因及蛋白表达的影响。 方法:建立内异症裸鼠模型,将60只裸鼠随机、平均分为三组,即雌激素组(雌二醇,30μg/kg,每5天肌注一次),孕激素组(黄体酮,10mg/kg,每5天肌注一次)、对照组(给予橄榄油0.2ml,每5天肌注一次)。于建模后7d、14d、21d、28天取裸鼠异位病灶,RT-PCR及Western Blot检测三组异位病灶中CX26、CX32、CX43基因及蛋白的表达。 结果:异位病灶中CX26 mRNA和蛋白在雌激素组表达增高,在孕激素组表达降低,该两组与对照组相比其差异均有统计学意义(P<0.05);雌激素组CX43基因及蛋白表达较孕激素组及对照组均降低,差异有统计学意义(P<0.05),孕激素组及对照组之间CX43基因及蛋白表达无差异(P>0.05);雌激素组、孕激素组及对照组异位病灶中均未能检测到CX32基因及蛋白的表达。 结论:①雌激素、孕激素对异位内膜组织中CX26基因和蛋白表达的调节作用相反。②异位病灶中未能检测到CX32基因和蛋白表达,其对子宫内膜细胞GJIC功能的影响及内膜的异位种植需待进一步研究。③雌激素可降低异位内膜组织中CX43基因和蛋白表达,孕激素对其无影响,推测雌激素可能通过降低CX43基因表达,降低内膜细胞GJIC功能,促进细胞异常增殖、分化,导致内膜异位种植能力提高。 第四部分CX43基因转染对人内异症在位内膜腺细胞GJIC功能及侵袭、增殖能力的影响 目的:探讨CX43基因对人内异症在位内膜腺细胞GJIC功能及侵袭、增殖能力的影响。 方法:构建同时表达CX43和增强型绿色荧光蛋白的载体,脂质体法转染人内异症在位内膜腺细胞,荧光划痕试验检测细胞GJIC功能,软琼脂克隆形成试验检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。 结果:转染组腺细胞CX43基因及蛋白表达增加,细胞GJIC功能较空载体组和对照组提高(P<0.05),软琼脂克隆形成试验发现转染组细胞增殖能力较空载体组和对照组下降(P<0.05),Transwell小室试验发现转染组细胞侵袭能力较空载体组和对照组减弱(P<0.05)。 结论:提高内异症在位内膜腺细胞CX43基因表达,可恢复其GJIC功能,降低细胞增殖活性及侵袭能力,可望减少内膜异位种植。