急性白血病耐药相关基因表达及其与临床关系的研究

目的 为较系统全面地探讨急性白血病耐药相关基因与临床化疗疗效、预后的关系，本文应用半定量和(或)定量逆转录—聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)检测急性白血病患者多药耐药基因(Multidrug resistance gene-1，mdr-1)、多药耐药相关蛋白基因(Multidrug resistance-associated protein gene，mrp)、肺耐药相关蛋白基因(Lung resistance-related protein gene，1rp)、乳腺癌耐药相关蛋白基因(Breast cancer resistance protein gene，bcrp)、谷胱苷肽S转移酶基因(Glutathione-S-transferases，GSTs)、DNA拓扑异构酶基因(Topoisomerase，Topo)及bcl-2基因表达水平的高低，为判断急性白血病多药耐药(Multidrugresistance，MDR)的发生和预后、克服白血病MDR提供实验依据。 方法 将140例急性白血病(Acute Leukemia，AL)患者按病程分为初治组、完全缓解组和复发组；按治疗效果分为敏感组和耐药组。用半定量RT-PCR法检测急性白血病患者外周血或骨髓中bcrp、mdr-1、mrp、1rp、GSTα、GSTπ、TopoⅠ、TopoⅡα、TopoⅡβ、bcl-2等基因的mRNA表达水平的高低。通过琼脂凝胶电泳法，计算 有关基因的相对表达量。还建立实时荧光定量 RTICR（Real time luorescent quantitative RT－PCR，FQ RT－PCR）检坝 bcrp、mdr－l、p。 lrp的精确拷贝数，探讨化疗疗效及预后与耐药相关基因表达之间的 关系。 结果（一）通过半定量 RTPCR检测 AL患者上述 10个基因 的表达水平，得到如下结果： 1．AL组 bcrp、lrp、GST厂、TOpo 11a、Tope 11日十对表达水 平明显高于对照组，GST Q表达水平明显低于对照组（P＜0刀引。 2．AL复发组bcrp、md，刁表达水平Hg显高于初治组，差别具有 显著性（ ＜0刀1）。 3．AL耐药组mdr叫表达水平明显高于敏感组 巾＜0刀引。 4．耐药组bcrp、mdr刁、mrp表达阳性率明显高于敏感组（P＜0刀引。 5．bcrp、mdr叫、mrp、lrp基因同时阳性的思者CR率明显低于 1～3个基因阳性的患者 中刃刀1人 6．经等级柏关分析显示 mdr！ GST。与耐药性呈显著正相关， GST。和 TopollQ与耐药性呈显著负相关（P＜0＊引。 7．经多因素逻辑回归分析示ndr刁与预后不良呈显著正相关。 8．经直线相关分析，bcrp与mdr八 mdrl与lrp、mdrJ与GST a、mrp与 lrp呈显著正相关，P＜0刀5。m甲与 GST。呈显著负相关， P＜0刀1。 （二）为了更准确测定 bcrp、mdr刁、mrp、冲基因的拷贝数， 我们建立了 FQ RTPCR方法，制备了标准曲线，结果显示： 3 1．AL组krp基因拷贝数明显高于对照组0叼．05人 2．从复发组mdrl拷贝数明显高于初治组0＜0刀引。 3．AL耐药组 mdrl拷贝数明显高于敏感组o＜0刀5入 4，经直线相关分析显示mdrq与帅、mdrl与冲、p与一 呈显著正相关。 5．经等级相关分祈示mdr刁和冲的表达与耐药性密切相关。 结论 通过本研究结果得出如下结论：l．急性白血病多药耐药的 发生涉及的机制较多，与bcrp、mdr刁 mrp及lrp基因中一项或几项 异常表达有关，bcrp、mdr刁、m叩及lrp均可作为判断临床多药耐药 的指标。2．GSTS和 TopO在酶介导耐药机制中的具体作用需结合其它 因素综合分祈，不能将其孤立地作为判断耐药的肯定指标。3．多基因 联合运用预测临床MDR效果优于单一基因的预测，白血病多药耐药 的发生是多种基因共同作用的结果。但仅从上还有关基因的检测仍不 能完全解释临床发主耐药的情况，可能存在其他未知的新的耐药机 制。