柑桔果实主要类黄酮成分检测及含量分析

我国是柑桔的原产地，品种资源丰富，柑桔产量居世界第二。流行病学和动物试验研究表明，柑桔类水果中类黄酮、类胡萝卜素、类柠檬苦素等活性物质，具有抗氧化活性、抗癌、预防循环系统疾患、抗炎症、抗过敏及抗菌等功效，有望应用于功能性食品的开发中。因此，开展我国不同种类柑桔果实中类黄酮化合物的含量检测及其成分分析研究，意义重大。 本文研究了利用高效液相色谱法同时检测柑桔中柚皮素-7-β-芸香糖苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草甙、柚皮苷元、橙皮素等7种黄烷酮和甜橙黄酮、川皮苷、桔黄酮等3种多甲氧基黄酮的分析方法，测定了我国甜橙、宽皮柑桔、柚、柠檬及杂柑等主要种类的124个果汁样品（柑桔原汁）和81个果皮样品（干果皮）中的黄烷酮和多甲氧基黄酮的含量，并初步探讨了不同种类柑桔果汁和果皮中类黄酮的分布规律。主要研究结果如下： 1、在国内首次建立了同时检测柑桔中橙皮苷、柚皮苷、柚皮素-7-β-芸香糖苷、甜橙黄酮等10种类黄酮化合物的高效液相色谱法。果汁样品用70％甲醇提取，果皮样品用50％二甲基甲酰胺提取，Waters Symmetry C18分析柱（250×4.6mm，5μm），0.2％乙酸水溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，二极管阵列检测器（287 nm，330nm）检测，40min内能将10种类黄酮完全分离，7种黄烷酮的平均回收率在94.20％～104.7％之间，相对标准偏差为1.48％～5.41％，精密度0.54％～4.05％，最低检测限0.005 mg／L～0.01mg／L；3种多甲氧基黄酮的平均回收率在97.37％～106.58％之间，相对标准偏差为1.95％～2.48％，精密度0.31％～0.78％，最低检测限均为0.01 mg／L。结果表明该方法操作简单，方便快速，具有较高的灵敏度和精密度，可满足柑桔类水果的质量控制和品质快速检测的需要。 2、系统分析了甜橙、宽皮柑桔、杂柑和柠檬等种类的124个柑桔果汁样品。结果表明，不同种类柑桔果汁中黄烷酮化合物的组成不同。甜橙、宽皮柑桔、杂柑和柠檬汁中的黄烷酮化合物主要为橙皮苷，介于68.39mg／L～233.88mg／L之间，其次是柚皮素-7-β-芸香糖苷和香风草甙，柚皮苷、新橙皮苷、柚皮苷元和橙皮素很少检出；柚汁中的黄烷酮化合物以柚皮苷为主，平均含量为166.41mg／L，几乎为7种黄烷酮总含量的90％，少量为柚皮素-7-β-芸香糖苷和橙皮苷；葡萄柚汁中的黄烷酮化合物主要为柚皮苷和柚皮素-7-β-芸香糖苷，平均含量分别为753.34mg／L和199.23mg／L，以及微量的橙皮苷（4.75mg／L）。在所测果汁样品中，以湖南产冰糖橙果汁中的橙皮苷、柚皮素-7-β-芸香糖苷和香风草甙含量最高，分别为482.18mg／L、612.88 mg／L和186.41 mg／L。 同样，不同种类柑桔果汁中多甲氧基黄酮化合物的组成也不同。甜橙黄酮、川皮苷和桔黄酮主要存在于甜橙、宽皮柑桔和杂柑果汁中，而柚、葡萄柚和柠檬汁均未检出。主栽宽皮柑桔果汁中的多甲氧基黄酮总含量平均为6.89 mg／L，橙汁为5.64 mg／L，杂柑果汁为3.26mg／L。而国家种质资源圃中扁桔汁中的川皮苷、桔黄酮和甜橙黄酮含量最高，分别为16.98mg／L、7.89 mg／L和3.12mg／L。 3、对81个柑桔果皮样品中的10种类黄酮化合物的含量测定表明，果皮中的类黄酮含量丰富，其黄烷酮几乎是果汁中的50～100倍，多甲氧基黄酮含量远远高于果汁。 不同种类柑桔果皮中黄烷酮和多甲氧基黄酮含量不同，甜橙果皮中的类黄酮以黄烷酮为主，约为类黄酮总含量的73.99％，而宽皮柑桔中的类黄酮则以多甲氧基黄酮为主，约为类黄酮总含量的53.19％，其多甲氧基黄酮的含量是甜橙果皮中的5.24倍。 宽皮柑桔果皮中的类黄酮含量大小依次为川皮苷＞橙皮苷＞桔黄酮＞柚皮素-7-β-芸香糖苷＞甜橙黄酮＞香风草甙，而甜橙果皮为橙皮苷＞川皮苷＞柚皮素-7-β-芸香糖苷＞甜橙黄酮＞香风草甙＞桔黄酮。 椪柑果皮中多甲氧基黄酮含量远远高于其它品种，其中又以浙江产椪柑果皮中含量最高，高达1.5％（以干重计），可作为提取多甲氧基黄酮化合物的优质原料，为柑桔皮渣综合利用开辟了新途径。 4、通过比较甜橙和宽皮柑桔中柚皮素-7-β-芸香糖苷、橙皮苷、香风草甙等黄烷酮以及甜橙黄酮、川皮苷等多甲氧基黄酮的含量，表明其多甲氧基黄酮总量与桔黄酮的比值（PMFs／TNG）以及甜橙黄酮与桔黄酮的比值（SNT／TNG）有较大差异，可为甜橙和宽皮柑桔的区分提供参考依据。