云南仓储烟叶霉变及其生物防治研究

本文对云南部分地区烟草储藏期霉变菌及其拮抗菌进行了分离鉴定，对霉变菌有强拮抗活性的细菌菌株抗菌物质的种类、部分理化性质进行了初步研究。 从云南弥勒、曲靖、泸西和临沧等地采集霉变烟样，采用稀释平板法共分离到霉变菌株38株，经鉴定分别属于5个属：曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）、根霉属（Rhizopus）、毛霉属（Mucor）和木霉属（Trichoderma）。其中曲霉属和青霉属真菌是引起烟叶霉变的主要微生物类群。黄曲霉原变种（Aspergillus flavus var．flavus）、烟曲霉椭孢变种（Aspergillus fumigatus var.ellipticus）和黑曲霉（Aspergillus niger）为采集地引起烟叶霉变的优势菌种。 通过混合平板法从云85、云87混合烟叶表面分离到对霉变菌有抑制作用的细菌65株。同时测定了分离自烟草根际的43株细菌菌株的拮抗活性。以黄曲霉原变种为指示菌株，以R值为筛选标准。R=病原菌向拮抗菌生长的距离／对照菌落半径。R值与拮抗作用大小成反比。结果表明，在所测试的菌株中，有较强拮抗作用的菌株有5个：DY11、B011、B022、B054、B055，其R值分别为0.368、0.365、0.37、0.368、0.35。B055经鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）。 对5株拮抗作用强的菌株分别进行烟叶防霉试验，拮抗菌悬液的浓度为1×10～8cfu／ml，在不同温度、湿度条件下，B055表现出很强的拮抗效果，霉变率在40％以下。储藏烟叶的安全水分有显著增加，烟叶的常规化学成分（总糖量、总烟碱、总氮、蛋白质、K+、Cl-）没有明显变化。单料烟评吸结果除B054菌株处理的烟样杂气重，刺激性大外，与对照无明显差异。 B055菌株的拮抗机制在于产生抗菌物质。抑菌活性检测跟踪表明B055菌株产生的抗菌物质在胰蛋白胨、葡萄糖、马铃薯培养液中培养72h，抑菌活性达到最大值。该物质可通过硫酸铵盐析沉淀获得，盐析饱和度为30％-60％。该物质经Tricine-SDS-PAGE电泳，只有微弱条带。121℃高温灭菌30min及在常温（23-26℃）保存2月后，对黄曲霉原变种的抑制作用不减。且经紫外照射和不同酸碱（pH2.6-11.8）处理后，除在pH4.0-5.2之间为可逆沉淀外，其余抑菌作用也未有明显变化。经固相萃取后，50％甲醇洗脱下的组分活性最高。综合以上性质，初步断定该物质为小分子的肽类物质。