消癌解毒方对H22荷瘤小鼠和人肝癌SMMC-7721细胞的影响及机制研究

目的：通过对H22荷瘤小鼠移植瘤基因表达谱的检测,发现更多与消癌解毒方治疗作用相关的信号通路和细胞因子。通过细胞实验,从细胞分了水平进一步探讨消癌解毒方抗癌机制。 方法：动物实验部分,H22荷瘤小鼠随机分为空白对照组,消癌解毒方低、中、高剂量组和顺铂组。应用基因芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织的差异表达基因；应用Gene Ontology (GO)和pathway分析,找出与消癌解毒方抗癌机制相关的信号通路和基因；并用实时定量PCR法(Realtime-PCR)验证MMP9、MMP12、TIMP2、VEGF和TGFβ等基因的表达。细胞实验部分,以低、中、高剂量组的消癌解毒方含药血清培养人肝癌SMMC-7721细胞,噻唑蓝还原法(MTT)检测消癌解毒方对肝癌细胞的抑制作用；电镜观察细胞的凋亡形态；膜联蛋白A5一绿色荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)流式细胞仪检测细胞的凋亡率；Western Blot法检测细胞TLR2、TRAF6、TGFβ、VEGF、MMP2、 Survivin和Livin蛋白的表达。 结果：消癌解毒方能改变H22荷瘤小鼠移植瘤多个基因的表达,并能显著影响多个与肿瘤生长、凋亡和免疫相关的信号通路；下调H22荷瘤小鼠MMP9、MMP12、VEGF和TGFβ,上调TIMP2和IRF1基因的表达。消癌解毒方含药血清能明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞在体外的增殖,抑制率以24h时效果最佳,分别为低剂量组(4.2%)、中剂量组(12.1%)、高剂量组(35.8%)、顺铂组(35.3%),消癌解毒方高剂量组与顺铂组无统计学差异(P>0.05)；消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡,电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变；Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞24h后的凋亡率,高剂量组(23.04±1.6%)与顺铂组(22.84±4.4%)差异无统计学意义(P>0.05)；Western Blot法检测发现,消癌解毒方各剂量组TLR2、TRAF6、TGFβ、 VEGF、MMP2、Survivin和Livin蛋白的表达明显低于空白对照组。 结论：消癌解毒方能抑制H22荷瘤小鼠移植瘤的生长,影响多个与肿瘤增殖、凋亡和免疫相关的基因和信号通路；下调H22荷瘤小鼠MMP9、MMP12、VEGF和TGFβ基因,上调TIMP2和IRF1基因的表达。消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,促进其凋亡；下调TLR2、TRAF6、TGFβ、VEGF、MMP2、Survivin和Livin蛋白的表达。这些可能是消癌解毒方发挥抗癌作用的机制。