基于尿液代谢组学的脾气虚证本质研究

目的:脾气虚证实质研究是证本质研究的一项重要内容。中医学认为脾气不足,运化功能失常,津液不能布散而停滞体内,可产生湿、痰、饮等病理产物,从而引发各种不同的疾病,故有“内伤脾胃,百病由生”“脾为生痰之源”之说。现代医学认为中医脾是一个多系统、多器官的功能单位,它是以消化系统为基础的,包括能量代谢和水液代谢,并与血液、内分泌、免疫和神经系统等有密切联系的一个概念。代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是以中心性肥胖为中心,涉及多种代谢异常包括血压、血糖、血脂,与心血管疾病紧密联系的疾病状态,其病因学主要以肥胖为核心,痰湿是肥胖的重要病理因素,而MS以肥胖为中心,可以说痰湿是贯穿MS的主要证候群的中心病理因素。由此可见,脾虚失运脾不散精是MS发生的重要病机。因此代谢综合征的发病,与脾的功能密不可分。代谢组学是一门新兴科学,广泛应用于医学领域,它通过核磁共振(NMR)、色谱(GC)、质谱(MS)等现代仪器分析手段,定性或定量研究生物体液或组织中的小分子代谢产物,系统地揭示疾病过程中的生理病理状态,而这种系统性正与中医学的整体观相吻合。目前代谢组学已经作为一种新的技术应用于研究临床疾病的诊断。本研究运用病证结合手段,采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术的代谢组学方法,以代谢综合征为基础病探讨其脾气虚患者尿液中小分子代谢组成分。挖掘代谢组变化模式或特征峰,通过综合集成分析,尝试对中医脾气虚证的诊断或评价指标进行定性、定量的表达。从而进一步揭示脾气虚证的代谢产物特征,揭示中医脾本质的现代研究指标。 方法:病例来源于大连医科大学附属第医二院体检中心,年龄40-60岁的体检人员。采用2005年4月国际糖尿病联盟(IDF)颁布的代谢综合征诊断标准,2002年《中药新药临床研究指导原则》的脾气虚证诊断标准将人员分成3组即代谢综合征脾气虚组、代谢综合征组及正常组。将入选人员晨尿或二次晨尿1ml由-20℃保存一周后转移至-80℃冰箱备用。运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术分析尿液成分,采用偏最小二乘-判别分析法(PLS-DA)对数据进行处理。并且对表达差异的尿液代谢产物定性。 结果:经代谢组学分析后,PLS-DA模式图显示每两组间尿液中的代谢轮廓都有良好的区分,并得出相应的潜在标志物即:代谢综合征尿液中保留时间为10.0895出现的分子量为130.048的未知化合物和310.198的肉碱相对正常组浓度减低;代谢综合征脾气虚组尿液中1.1242时出现的分子量为229.137的leucylproline较代谢综合征组和正常组均明显升高,而5.7365时出现的分子量为265.115的苯乙酰谷氨酰胺较代谢综合征组和正常组均明显降低。 结论: 1.脾气虚代谢综合征组与代谢综合征组和正常对照组尿液代谢轮廓均有良好区分。 2.发现了一些脾气虚证的潜在标记物,如leucylproline和苯乙酰谷氨酰胺。有助于脾气虚证临床微观指标的诊断,对中医脾气虚证的量化起了一定的规范作用。 3.代谢组学技术的系统性与中医的整体观念相似,能够更好的将中医证本质与现代化研究相结合。