Beclin1、LC3、Atg9a mRNA及氧化应激指标在类风湿关节炎中的表达及临床意义

目的:本研究检测分析RA患者和健康人群外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中自噬相关基因Beclin1、LC3、Atg9a的表达;RA患者、健康人群及其他自身免疫性疾病,包括骨性关节炎(osteoarthritis,OA)、强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)、痛风患者血清中氧化应激指标水平;RA、其他自身免疫性疾病患者关节滑液中氧化应激指标水平,并分析Beclin1、LC3、Atg9a mRNA相对表达量与氧化应激指标的相关性。旨在探讨自噬、氧化应激在RA中的作用及三者之间的关系,以期发现有效的药物治疗靶点、诊断标志物和监测指标。方法:选取符合诊断标准的RA患者54例、健康人群44例作为研究对象,采集其空腹外周血,差速密度梯度离心法分离PBMCs后提取总RNA,采用反转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法检测并分析Beclin1、LC3、Atg9a mRNA的表达量;选取RA患者54例,健康人群44例,其他自身免疫性疾病患者24例收集血清,另选取RA患者、其他自身免疫性疾病患者各18例收集关节滑液,比色法检测分析研究对象血清、关节滑液中氧化应激指标丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平,并对RA患者这三项氧化应激指标与自噬相关基因Beclin1、LC3、Atg9a进行相关性分析。结果:real-time PCR结果:1.RA组相较健康对照组,LC3 mRNA在PBMCs中相对表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);Beclin1、Atg9a mRNA表达量略有升高,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。2.与RA治疗前组相较,治疗后组Beclin1、LC3 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),而Atg9a mRNA治疗后相对表达量略有下降但没有统计学差异(P>0.05);3.LC3 mRNA在RA疾病活动期相对表达量升高且在四个活动期亚组间均有差异,活动度越高,LC3mRNA表达量越高(P<0.05),而Beclin1、Atg9a mRNA在疾病活动期和疾病缓解期无明显差异(P>0.05)。氧化应激检测结果:1.血清中,RA组MDA、NO水平相较健康对照组显著升高,SOD水平显著下降(P<0.05);2.关节滑液中,RA组与其他自身免疫性疾病组MDA、NO二者无统计学差异;SOD在两组中水平降低,但无明显差异(P>0.05);3.RA组治疗后血清中MDA、NO水平较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后SOD水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。4.MDA水平在RA疾病活动期升高(P<0.05),而在不同活动度组间没有差异(P>0.05)。SOD水平在RA疾病活动期降低,缓解期升高(P<0.05),且随疾病活动度的降低,SOD的水平逐渐升高,组间差异明显(P<0.05)。NO水平在疾病活动期和缓解期无明显差异(P>0.05)。5.NO水平与自噬呈正相关(r=0.389,0.394;P<0.05),而MDA、SOD水平与自噬相关基因不相关。结论:RA患者存在自噬增高和氧化应激的状态,且自噬与活性氧水平相关。自噬可作为治疗靶点改善RA患者的病情,氧化应激指标可成为监测疗效新指标。