促红细胞生成素对缺氧缺血新生鼠脑组织保护作用的研究

目的探讨体外注射重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,RhEPO)对新生鼠缺氧缺血后脑组织超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)水平以及对脑细胞凋亡的影响,阐明其对新生鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的保护作用。 方法1.新生鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型分组及制备:7日龄Wistar大鼠101只,随机分成3组,假手术组(n=25)、对照组(生理盐水组)(n=38)、实验组(RhEPO组)(n=38)。对照组与实验组分别结扎右侧颈总动脉,缺血术后恢复3h,置于2000ml常温常压缺氧舱内,以2-3L/min的速度输入含8%氧气和92%氮气的混合气体,持续2h,建立HBID的动物模型。模型制备后对照组即刻腹腔注射生理盐水0.5ml/只,实验组腹腔注射RhEPO 4000 U/kg,稀释到0.5ml。假手术组仅游离右侧颈总动脉,不结扎,不低氧处理。2.新生鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型的观察:假手术组于处置后、对照组与实验组于注射药物后2h、12h、24h、48h、72h、96h断头取右侧脑组织,按重量体积比1:9加生理盐水用玻璃研磨制成10%脑组织匀浆,置于低温离心机中,以3000r/min离心10min,然后取脑组织匀浆上清液,用考马斯亮蓝法测蛋白含量,硫代巴比妥酸法测定MDA的含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD,硝酸还原酶法测定NO,并进行统计学分析。同时三组大鼠分别于术后24h选右侧脑取丘脑1/3平面行冠状切面,4%多聚甲醛固定,制作石蜡切片,行HE染色及Tunet染色,光镜下观察细胞凋亡情况。 结果对照组与假手术组比较SOD明显降低,2～96h差异有显著性意义(P＜0.01),而MDA值明显增高,2～72h差异有显著性意义(P＜0.01),NO 2h显著升高(P＜0.05),12-96h差异有显著性意义(P＜0.01)。实验组与对照组比较,SOD明显升高,12～96h差异有显著性意义(P＜0.01),而MDA明显降低,24～72h差异有显著性意义(P＜0.01),NO明显降低,24-96h差异有显著性意义(P＜0.01)。HE染色及Tunel染色对照组海马CA1区凋亡细胞数明显高于实验组。 结论重组人促红细胞生成素可升高新生鼠缺氧缺血脑组织的SOD、降低MDA,改善缺氧缺血脑组织自由基导致的脂质过氧化反应,抑制NO产生,抑制神经细胞凋亡,从而对新生鼠HIBD起保护作用。