当归多糖的制备、结构分析和抗辐射效应研究

当归（Radix Angelica sinesis）为伞形科（Umbrelliferae）草本植物,具有多种生理功能,在我国自古至今一直被广泛用于多种疾病的治疗,素有“十方九归”之称。当归多糖是当归的主要生物活性成分。目前国内对当归多糖的研究主要侧重于调节免疫力、抗癌等药理和功效,对其结构研究较少,且不够深入。本论文对甘肃岷归多糖的制备、结构特征和抗辐射效应进行了研究,研究结果如下: 分析了原料当归的化学组成:水分11.0%,粗蛋白18.5%,粗脂肪3.8%,灰分8.1%,纤维素9.6%,还原糖37.7%,多糖10.1%。比较了水提粗多糖W-ASP和EDTA/碱提粗多糖E-ASP的得率和提取率:W-ASP得率为10.8%,占总得率（15.2%）的71.1%;E-ASP得率为4.4%,占总得率的28.9%,表明W-ASP是粗多糖的主要组成部分。W-ASP的提取率为5.7%,占当归多糖总含量（10.1%）的56.4%;E-ASP提取率为1.8%,占总量的17.8%。W-ASP和E-ASP的化学组成分别为:多糖54.36%/43.82%,糖醛酸24.80%/36.26%,蛋白8.34%/14.40%,灰分21.66%/19.73%。中性糖由Gal、Ara、Glc、Rha和少量Man组成。E-ASP的糖醛酸、蛋白质以及Glc含量高于W-ASP。 选用外周血白细胞和淋巴细胞数量以及体重作为W-ASP和E-ASP的抗辐射活性筛选指标。实验结果表明,W-ASP和E-ASP对经3.0 Gy 60Coγ射线照射小鼠的外周血白细胞、淋巴细胞均有保护作用,对体重的回升也有促进作用,但E-ASP的效果不如W-ASP。运用响应面分析方法,确定了当归水提粗多糖的最佳工艺参数:浸提温度85°C,浸提时间2 h,浸提2次,料水比1:10。 对水提当归粗多糖的分级纯化和化学组成进行了研究。W-ASP经DEAE-Sepharose CL-6B柱层析分级后得到3个多糖组分:W-ASP1为中性多糖,W-ASP2为弱酸性多糖（糖醛酸含量35.38%）,W-ASP3为酸性多糖（糖醛酸含量58.27%）。W-ASP3是当归多糖的主要组分,蛋白含量为2.53%,主要由Gal、Ara和Rha组成,以及极少量的Glc和Man;HPLC凝胶过滤色谱分析表明W-ASP3为均一组分,分子量约为95 KDa;HPAEC-PAD色谱分析结合单糖组成和IR图谱确定是一种果胶多糖。 分别采用比色法、GC-MS和HPAEC-PAD色谱技术测定了当归果胶多糖W-ASP3的糖醛酸含量,并对三种检测方法进行比较。HPAEC-PAD法（53.62%）和GC-MS法（56.06%）测定的GalA含量均略低于比色法（58.27%）。 采用傅里叶变换红外光谱法（FT-IR）测定了当归多糖样品的酯化度（DE）。通过建立DE与A1730/（A1730+A1630）之间的线性回归方程（R2 = 0.822）,测得当归粗多糖及其分级组分的酯化度介于42.36% ~ 54.06%之间。将FT-IR法与化学滴定法进行了比较,两种方法测得的DE值之间的相对误差在8%左右。