和厚朴酚抗浮游态和生物被膜态金黄色葡萄球菌活性研究

金黄色葡萄球菌是最常见的食源性细菌之一，其危害性一直都是世界各地食品安全组织所关注的。金黄色葡萄球菌可以附着于人体器官或食物表面，它能够分泌出多糖物质、蛋白质、有机盐和无机盐沉淀物等的物质，并用这些物质将细菌包裹住形成生物被膜。生物被膜形成后，细菌的抵抗宿主免疫系统和抑制剂的能力会大幅度的提高。世界卫生组织（WHO）曾公告，食源性疾病和食品污染已成为世界性公共卫生问题，每年发生的食源性疾病近数十亿例，发达国家每年至少有三分之一的人群患食源性疾病。而随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的出现，使得对于金黄色葡萄球菌的治疗难度增加。因此，找到有效的抗金黄色葡萄球菌生物被膜药物已成为刻不容缓的任务。人们对于金黄色葡萄球菌抑制剂的研究也一直都在进行，希望找到—种新型低浓度高效、无毒害、性质稳定、以及生产成本较低的金黄色葡萄球菌柳制剂。在自然界的天然产物和中草药植物内含有许多具有抗菌结构的小分子化合物，这些都为我们提供了更丰富的资源去寻找新型的金黄色葡萄球菌生物被膜抑制剂。 本文中研究了和厚朴酚对浮游态和被膜态金黄色葡萄球菌的抑制机制。通过刚果红实验、结晶紫半定量法、纸片法、激光共聚焦实验鉴定了食源性金黄色葡萄球菌生物被膜的形成能力。通过二倍稀释法和琼脂平板法测定了和厚朴酚对浮游态金黄葡萄球菌最小抑菌浓度（MICs）、最小杀菌浓度（MBCs）和被膜态金黄葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIBCs）、最小杀菌浓度（MBBCs）。结果显示：和厚朴酚对浮游态金黄色葡萄球菌的MICs值范围为8～16μg/mL，MBCs值范围为8～32μg/mL；对被膜态金黄色葡萄球菌的MICs值范围为32～128μg/mL，MBCs范围为＞512μg/mL。由此可以看出，和厚朴酚对标准菌株及食品分离株均有显著的抑菌作用。通过分光光度计法测定了和厚朴酚对浮游态和被膜态金黄色葡萄球菌的生长抑制曲线，进一步确定了和厚朴酚的抑制效果。 本文通过研究胞外DNA（eDNA）的释放、多糖胞间黏附素（Polysaecharideimercellular adhesion，PIA）的分泌、控制生物被膜形成相关基因的抑制情况，考察了和厚朴酚对被膜态金黄色葡萄球菌抑菌机制。结果表明：在和厚朴酚加入时，eDNA释放量、PIA分泌量及控被膜形成基因的含量都逐渐减少（P>0.05）。此外，还采用RT-PCR和Western Blot实验方法来研究和厚朴酚对金黄色葡萄球菌毒力相关蛋白α-溶血素、SEA和SEB的抑制情况，结果表明：和厚朴酚能够明显的抑制α-溶血素、SEA和SEB的表达情况。 此外，本文还研究了和厚朴酚对牛奶中污染的浮游态金黄色葡萄球菌清除效果和对不锈钢表明形成的被膜态金黄色葡萄菌的清除情况，检测和厚朴酚在实际中的应用效果。实验结果表明：当和厚朴酚浓度为16μg/mL时，牛奶中感染金黄色葡萄菌的杀菌率已达到99%以上。对于不锈钢片表面形成的被膜态金黄色葡萄菌，和厚朴酚作用下的杀菌率也为99%以上。 本研究阐明和厚朴酚抑制浮游态和被膜态金黄色葡萄球菌的分子机制，为食品的防腐、保鲜、延长保质期和货架寿命提供了新型的抗菌剂，同时也为临床治疗金葡菌感染提供了新型治疗方案。