糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是由于慢性高血糖引起的肾脏损伤,是糖尿病重要的微血管并发症之一,临床上主要表现为持续性蛋白尿和(或)肾小球滤过率进行性下降,最终形成终末期肾病(End stage renal disease,ESRD)。目前,控制血糖、血压以及肾素-血管紧张素-醛固酮系统仍是治疗DN的主要方法,但是仍然有残留风险的存在。中医由于其整体观及辨证论治的特点,在DN的治疗上具有独特的优势,中医将DN一般分为气阴两虚证、肝肾阴虚证、气血两虚证、脾肾阳虚证等4种证型,其中气阴两虚证是中医临床上最常见的证型,所以关于气阴两虚证DN的研究具有重要意义。动物模型是当下研究DN发病机制与治疗方法的主要手段,建立出符合中医临床特征的DN病证结合动物模型,将会促进中医药在DN中的应用。因此,本研究首先应用自发性糖尿病KK-Ay小鼠制备DN气阴两虚证小鼠模型,然后在此模型上对治疗DN气阴两虚证的中药芪术颗粒(QIZHUKELI,QZKL)的药效学进行评价。目的:研究自发性KK-Ay小鼠DN的证候表现,建立出符合临床表现的DN气阴两虚证动物模型,并在该模型上进行QZKL的药效学研究,为DN气阴两虚证的研究提供新的思路和方法。方法:1 DN气阴两虚证动物模型的研究将雄性KK-Ay小鼠(高脂饮食)和雄性C57小鼠(普通饮食)养至12周,禁食不禁水,收集24h尿液,检测尿微白蛋白/肌酐比,按照尿微白蛋白/肌酐比将成模的KK-Ay小鼠随机分为模型组一(14周)、模型组二(16周)、模型组三(23周),C57小鼠随机分为正常组一、正常组二、正常组三,实验期间正常组小鼠喂养普通饲料,模型组小鼠喂养高脂饲料,各组小鼠自由饮水饮食,不做任何人为干预,分别于14周、16周和23周时处死相应组小鼠。检测小鼠尿量、尿微白蛋白/肌酐比、血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、脏器系数等疾病相关指标,以及体重、摄水量、摄食量、抓力、舌象、脉搏、ATP、ADP、ACTH、CRH等证候相关指标,确定DN气阴两虚证小鼠模型的最佳时间。2芪术颗粒对气阴两虚证DN小鼠的干预作用将DN模型判定成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组(9只)、卡格列净片组(9只)和QZKL组(10只),C57小鼠作为正常组(10只)。正常组和模型组按照10ml/kg灌胃给纯水,卡格列净片组按照0.13g/kg灌胃给药,QZKL组按照28.6g生药/kg灌胃给药,两组的给药体积均为10ml/kg,每天一次,连续给药八周。检测小鼠尿量、24h尿蛋白定量、血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐、血脂、脏器系数等疾病相关指标,体重变化、摄水量、摄食量、抓力、舌象、脉搏、ATP、ADP等证候相关指标。结果:1 DN气阴两虚证动物模型的研究(1)疾病指标与同期正常组比较,各模型组小鼠尿微白蛋白/肌酐比、血糖、HbA1c均显著升高(P<0.01);14周和16周时模型组小鼠肾脏系数无明显变化(P>0.05),23周时模型组小鼠脏器系数明显降低(P<0.01)。(2)证候指标各正常组小鼠毛色光亮顺滑,精神状态活动量均正常;各模型组小鼠毛色粗糙无光泽,疲倦懒动,尿液浑浊,尿量增多并有异味。与同期正常组比较,各模型组小鼠体重、摄水量、摄食量均明显升高(P<0.05);各模型组小鼠脉搏幅度均明显降低(P<0.01);14周、16周和19周时(模型组三,下同)模型组小鼠抓力均显著降低(P<0.01),22周时(模型组三,下同)模型组小鼠的抓力无明显变化(P>0.05);14周和22周时模型组小鼠舌面R、G、B值均无明显变化(P>0.05),16周时模型组小鼠舌面R值无明显变化(P>0.05),但是G、B值均明显升高(P<0.05);14周时模型组小鼠的ATP无明显变化(P>0.05),16周和23周时模型组小鼠的ATP均明显降低(P<0.05);14周和16周时模型组小鼠的ADP均无明显变化(P>0.05),23周时模型组小鼠的ADP明显降低(P<0.01);14周和16周时模型组小鼠血清的ACTH均无明显变化(P>0.05),23周时模型组小鼠血清的ACTH明显降低(P<0.05);14周时模型组小鼠的CRH无明显变化(P>0.05),16周和23周时模型组小鼠血清的CRH含量均明显降低(P<0.05)。2芪术颗粒对气阴两虚证DN小鼠的干预作用(1)疾病指标尿量:与正常组比较,模型组小鼠的尿量无明显变化(P>0.05),与模型组比较,卡格列净片组和QZKL组小鼠的尿量在给药4周和8周后均无明显变化(P>0.05);24h尿蛋白定量:与正常组比较,模型组小鼠的24h尿蛋白定量明显升高(P<0.01),与模型组比较,QZKL组小鼠的24h尿蛋白定量在给药4周后无明显变化(p>0.05),但是给药8周后显著减低(P<0.01);卡格列净片组小鼠的24h尿蛋白定量在给药4周和8周后均无明显变化(P>0.05),血糖、HbA1c:与正常组比较,模型组小鼠的血糖和HbA1c均明显升高(P<0.01),与模型组比较,卡格列净片组小鼠的血糖明显降低(P<0.01),QZKL组小鼠的血糖在给药2周、4周和6周后明显降低(P<0.01),但给药8周后无明显变化(P>0.05),卡格列净片组和QZKL组小鼠的HbA1c均明显降低(P<0.01);血肌酐、甘油三酯:与正常组比较,模型组小鼠的血肌酐和甘油三酯均无明显变化(P>0.05),与模型组比较,卡格列净片组和QZKL组小鼠的血肌酐、甘油三酯在给药4周和8周后均无明显变化(P>0.05);脏器系数:与正常组比较,模型组小鼠的脏器系数无明显变化(P>0.05),与模型组比较,卡格列净片组和QZKL组小鼠的脏器系数均无明显变化(P>0.05);(2)证候指标一般情况:正常组小鼠毛色光亮顺滑,精神状态活动量均正常,各模型组小鼠毛色粗糙无光泽,倦怠懒动,尿液浑浊,尿量增多并有异味。卡格列净片组和QZKL组均有所改善,活动量有所增加。体重变化:与正常组相比,模型组小鼠的体重变化明显升高(P<0.05),与模型组相比,QZKL组小鼠的体重变化明显降低(P<0.01);卡格列净片组小鼠的体重变化无明显变化(P>0.05)。摄水量、摄食量:与正常组相比,模型组小鼠的摄水量和摄食量均明显升高(P<0.05),与模型组相比,QZKL组小鼠的摄水量和摄食量均明显降低(P<0.05);卡格列净片组小鼠的摄水量和摄食量均无明显变化(P>0.05),抓力:与正常组相比,模型组小鼠的抓力无明显变化(P>0.05),与模型组相比,卡格列净片组和QZKL组小鼠的抓力明显增加(P<0.05);舌像:与正常组相比,给药4周后模型组小鼠的R、B值均明显增加(P<0.05),G值无明显变化(P>0.05),给药8周后,模型组小鼠的R、G、B值均无明显变化(P>0.05),与模型组相比,给药4周后卡格列净片组和QZKL组小鼠的R、G、B值均无明显变化(P>0.05),给药8周后QZKL组小鼠的R、G、B值均明显降低(P<0.01);卡格列净片组小鼠的R、B值均无明显变化(P>0.05),G值明显降低(P<0.05);脉搏幅度:与正常组相比,模型组小鼠的脉搏幅度明显降低(P<0.01),与模型组相比,QZKL组小鼠的脉搏幅度在给药4周后无明显变化(P>0.05),给药8周后明显增加(P<0.01);卡格列净片组小鼠的脉搏幅度在给药4周后明显增加(P<0.01),给药8周后无明显变化(P>0.05),ATP、ADP:与正常组相比,模型组小鼠的ATP无明显变化(P>0.05),ADP明显降低(P<0.01),与模型组相比,QZKL组的ATP和ADP均无明显变化(p>0.05),卡格列净片组小鼠的ATP明显降低(P<0.05),ADP明显升高(P<0.05),结论:1自发糖尿病KK-Ay小鼠高脂喂养至10-20周具有DN气阴两虚证的表现及特征,成功制备了一种DN气阴两虚证的病证结合动物模型。2芪术颗粒能显著改善DN气阴两虚证小鼠的多饮多食、抓力、舌像、脉搏幅度等证候指标,能明显降低小鼠的尿蛋白、血糖、糖化血红蛋白等疾病指标,具有明显的治疗DN气阴两虚证的药理作用。
