补肾解毒活血法防治化疗后骨髓抑制的作用机制研究

目的：研究补肾解毒活血法防治化疗后骨髓抑制的作用机制。 方法：140只昆明小鼠,雌雄各半,分预防实验和治疗实验两部分。 预防实验：60只小鼠,随机分为空白对照组、模型组、中药防护组,每组20只。中药防护组给予补肾解毒活血汤药,空白对照组、模型组分别给予等体积的生理盐水。每日灌胃1次,连续给药10d；第8d时采用腹腔注入环磷酰胺(100mg-kg-1·d-1),连续3天造模。各组随机抽取10只,在造模前1d及造模完成后的1、3、5、7、10d做外周血象检测；剩余10只在造模后次日做骨髓有核细胞计数(BMNC),计算胸腺、脾脏系数；粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E和BFU-E)集落培养；骨髓细胞凋亡检测；血清中EPO、GM-CSF检测。以研究补肾解毒活血法预防化疗后骨髓抑制的作用机制。 治疗实验：80只小鼠,随机分为空白对照组、模型组、中药治疗组、阳性对照组,每组20只。先采用与预防实验相同的方法造模,造模后次日开始连续10d给药,中药治疗组给予补肾解毒活血汤药,空白对照组、模型组分别给予等体积的生理盐水。阳性对照组在造模后1-3d,给予皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF) 0.03mg·kg-1·d1。各组随机抽取10只,分别于造模前1d及之后第1、3、5、7、10、14d做外周血象检测。剩余10只小鼠在造模后第11d做以下检测：胸腺、脾脏系数；BMNC; CFU-GM、CFU-E和BFU-E集落培养；血清中EPO、GM-CSF。以研究补肾解毒活血法治疗化疗后骨髓抑制的作用机制。 结果： 1.骨髓抑制动物模型预防实验和治疗实验中,经环磷酰胺造模后均出现WBC、PLT明显降低,符合典型的化疗后骨髓抑制表现。 2预防与治疗效果 外周血象预防实验结果显示,模型组WBC在造模后第1d降至最低,第5d恢复正常；PLT在造模后5d降至最低,10d恢复正常。中药防护组WBC在造模后1-5d, PLT在造模后3-7d。降低幅度均小于模型组(P<0.01或P<0.05) 治疗实验结果显示,模型组小鼠血象变化和预防实验类似。中药治疗组和阳性对照组WBC在造模后1-5d均高于模型组,两组比较无差异；而中药治疗组PLT降低幅度小,在5 d时已经有所恢复,至第7 d时,中药治疗组已恢复正常,明显高于模型组(P<0.01)和阳性对照组。 3机制分析 3.1胸腺与脾脏系数预防实验结果显示,模型组胸腺系数及脾脏系数出现下降,低于空白对照组,中药防护组可使小鼠胸腺系数增加,与模型组比有显著差异(P<0.05)。治疗实验结果显示,中药治疗组较空白对照组出现胸腺系数下降(P<0.05),脾脏系数升高(P<0.01),但与模型组相比,胸腺系数升高(P<0.05),脾脏系数降低(P<0.01)。 3.2血清EPO和GM-CSF预防实验结果显示,中药防护组GM-CSF低于空白对照组(P<0.01),但中药防护组下降程度明显低于模型组(P<0.01)。三组EPO均未出现变化。治疗实验结果显示,中药治疗组EPO和GM-CSF均低于空白对照组而高于模型组(P<0.01),阳性对照组仅GM-CSF高于模型组(P<0.01)。 3.3 BMNC和造血祖细胞中药防护组BMNC和CFU-GM较空白对照组减少(P<0.01),但明显高于模型组(P<0.01),CFU-E和BFU-E无变化；治疗实验结果显示,中药治疗组BMNC和HPC均低于空白对照组而高于模型组(P<0.01),阳性对照组仅BMNC和GM-CSF高于模型组(P<0.01)。 3.4骨髓细胞凋亡防护实验结果显示,中药防护组与空白对照组比较无差异,远远低于模型组出现的高凋亡率(P<0.01)。由于环磷酰胺引起的小鼠骨髓细胞凋亡主要集中在24h之内,故治疗实验未做此项检测。 结论： 1.采用分次腹腔注射环磷酰胺的方法可以成功的制作骨髓抑制小鼠模型,与临床恶性肿瘤患者在接受化疗时出现的骨髓抑制状态相似。 2.预防性给予补肾解毒活血方可以减轻环磷酰胺引起的WBC、PLT降低,而对化疗后出现骨髓抑制,治疗性给予补肾解毒活血汤药,又可以明显促进WBC、PLT的恢复。 3.补肾解毒活血方能增加骨髓增加小鼠的胸腺系数,降低脾脏系数,提高小鼠的免疫功能,减轻骨髓抑制。 4.通过预防性给予补肾解毒活血方,能提高小鼠血清GM-CSF,骨髓细胞BMC和CFU-GM,减轻化疗药造成的骨髓抑制,而治疗性的补肾解毒活血方不仅提高小鼠血清GM-CSF和EPO,还能提高BMC以及CFU-GM、CFU-E和BFU-E集落产率,恢复受抑制的骨髓造血功能。 5.预防性给予补肾解毒活血方能抑制骨髓细胞凋亡,减轻化疗造成的损伤,保护骨髓细胞。