中药王不留行主要成分对小鼠乳腺上皮细胞功能的影响

我国奶牛业普遍存在产乳量低、奶牛发病率高等问题。长期以来，人们主要用抗生素及一些化学合成物作为饲料添加剂来防治奶牛疾病，提高奶牛生产性能。但这些添加剂具有毒副作用大、残留高，易产生抗、耐药性和致畸、致癌、致突变等弊端，严重危害了人体健康。中药以其源自天然，具有毒副作用小、无残留、不易产生耐药性的优点，已广泛应用于我国奶牛业。许多具有补益气血、通经活络、调和脾胃的中草药及其复方制剂均具有显著的催乳作用。如党参、白术、黄芪、王不留行、当归、川芎、丝瓜络、路路通、甘草等中药含有多种营养物质和生物活性物质，能够补充机体营养，提高动物食欲，促进动物消化吸收，增强机体代谢，改善机体的造血机能和血液循环，以及杀灭微生物，增强机体免疫力，防治疾病发生，从而提高奶牛泌乳性能。 传统中药王不留行广泛应用于我国奶牛饲料添加剂中，具有行血通经，催生下乳，消肿敛疮等功效。其主要成分为多种皂甙类、黄酮甙类、香豆素类、生物碱类等成分。 本实验采用溶剂萃取法与酸碱法对王不留行三类主要成分(皂甙类、黄酮甙类及香豆素类)进行提取，并用化学方法及薄层层析方法予以鉴定。将三种成分分别以不同浓度添加入细胞培养液，一方面，采用MTT法检测这三类成分对体外培养的小白鼠乳腺上皮细胞增殖的作用，并运用激光共聚焦显微技术对乳腺上皮细胞中细胞周期蛋白cyclin D1的表达进行鉴定；另一方面，运用荧光定量RT-PCR方法对细胞中β-酪蛋白的表达进行检测，并用激光共聚焦显微技术对细胞信号通路中磷酸化stat5因子的表达进行鉴定，最后通过动物实验加以辅证。 实验结果表明，王不留行中的黄酮甙类成分对小鼠乳腺上皮细胞的增殖有明显的促进作用(P＜0.05)，并随其浓度(100～200mg／L)的增加，其促进作用增强；皂甙类成分则对小鼠乳腺上皮细胞的增殖有明显的抑制作用，并随浓度(50～200mg／L)的增加而抑制作用增强；香豆素类成分(20～200mg／L)则对小鼠乳腺上皮细胞的增殖无明显作用(P＞0.05)。 荧光定量RT-PCR结果表明，黄酮甙类成分可促进乳腺上皮细胞中β-酪蛋白基因的表达(P＜0.05)，皂甙类和香豆素类成分对β-酪蛋白基因的表达无明显作用(P＞0.05)。免疫荧光定量结果显示黄酮甙类成分可促进细胞周期蛋白cyclin D1的表达，表明黄酮甙类成分是通过激活cyclin D1的表达而促进乳腺上皮细胞增殖的。同时，黄酮甙类成分能够促进磷酸化的stat5因子的表达(P＜0.05)，表明黄酮甙类成分是通过激活Jak-stat5信号转导通路调控β-酪蛋白基因表达的。动物实验结果黄酮甙类成分能够提高小鼠泌乳量(P＜0.05)也证明了这一点。