目的：以传统中药复方双丹制剂的有效活性成分丹酚酸B (Sal B)和丹皮酚(Pae)为基础,采用基线等比增减法进行配伍设计,观察不同配比组合对体外实验离体血管舒张和心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响,同时观察不同配比组合对急性心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)模型的影响,并最终获得Sal B/Pae对MI/RI最佳保护配比组合；同时通过Western blot方法观察Sal B/Pae最佳配比组合对大鼠内皮细胞P-选择素的干预作用,从而希望为研制出机理和适应症相对较明确的新型中药复方提供一些研究思路和方法。
方法：本文主要在整体、器官、细胞和分子水平上探讨了Sal B/Pae对MI/RI的影响；采用离体血管舒张实验观察Pae/Sal B的不同配比组合对SD大鼠离体血管舒张程度的影响；细胞水平上主要比较Sal B/Pae的不同配比组合对原代心肌细胞缺氧再复氧损伤的影响,培养36 h时可观察到明显心肌细胞搏动,此时开始进行缺氧1h和再复氧3h模拟缺血再灌注损伤,缺氧损伤前3小时分别加入不同配比组合,观察心肌细胞的活力、细胞凋亡率和细胞内MDA表达水平；再采用急性心肌缺血再灌注损伤实验分别比较不同配比组合对急性MI/RI的影响,ip给药连续3 d,结扎左冠状动脉前降支,缺血30 min后再灌注120min,分别比较Sal B/Pae不同配比组合对SOD, MDA, NO, CK-MB,心肌梗死面积,心电∑-ST和组织形态等的影响；并通过Western blot检测了Sal B/Pae最佳配比对SD大鼠急性心肌缺血再灌注损伤中起始损伤黏附关键介导分子P-选择素的表达的变化,以探讨Sal B/Pae对MI/RI的可能保护作用机制。
结果：
1.离体血管舒张实验：Sal B和Pae不同配比组合对大鼠离体血管均具有明显的舒张作用,与Sal B/Pae 4/0及0/4组比较,3/1和2/2组合对大鼠离体血管都有明显舒张作用,其中以3/1舒张效果最佳。
2.原代心肌细胞培养缺氧再复氧损伤实验：Sal B, Pae和Sal B/Pae (3/1)分别在浓度为1 mg·mL-1, 100μg·mL-1, 10μg·mL-1,1μg·mL-1时对心肌细胞的损伤有一定的保护作用,在Sal B/Pae (3/1)浓度为10μg·mL-1时MTT测得心肌细胞活力最高；在Sal B, Pae和Sal B/Pae(3/1)浓度分别为1 mg·mL-1, 100μg·mL-1, 10μg·mL-1,1μg·mL-1时对心肌细胞凋亡有一定的保护作用,当Sal B/Pae (3/1)浓度为10μg·mL-1时细胞凋亡程度最低；在Sal B/Pae (3/1)浓度分别为100μg·mL-1,10μg·mL-1时对心肌细胞MDA的降低作用最明显。
3.急性心肌缺血再灌注损伤实验：各不同配比组合与模型组相比较,梗死程度均低于模型组；组间比较,Sal B/Pae 3/1组和1/1组分别与丹酚酸B单方组和丹皮酚单方组具有显著性差异,梗死程度都低于丹酚酸B单方组和丹皮酚单方组,其中以Sal B/Pae 3:1组效果梗死程度最低；心电∑-ST、MDA和CK-MB观察结果显示Sal B/Pae 3:1组低于其它组别,NO和SOD观察结果显示Sal B/Pae3：1组明显高于其它组别。
4. Western blot:Western blot结果进一步显示,与模型组比较,最佳配比组合组结果显示Sal B/Pae (3/1)组P-选族素表达较低,模型组P-选择素表达明显高于假手术组,差异显著。
结论：
1丹皮酚和丹酚酸B配比组合对大鼠离体血管的舒张和原代心肌细胞缺氧再复氧损伤都具有一定的保护作用,且配比组合的保护效果优于各单方组的保护效果；
2丹皮酚和丹酚酸B配比组合对大鼠的急性心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用,在丹酚酸B和丹皮酚之比为3：1时保护效果最佳,这说明丹酚酸B和丹皮酚两者在保护大鼠急性心肌缺血再灌注损伤方面可能存在某种协同或相加作用。
3丹皮酚和丹酚酸B配比组合对大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中P-选择素也具有一定的调节作用,这说明其保护作用机制可能与内皮细胞黏附分子P-选择素的表达存在某种关联。
