竹沥GC/MS成分分析及药理研究

目的：本项目旨在以往对竹沥成分及药效的研究基础上,采用新技术、新方法更进一步完善对不同种类竹沥质量控制体系,采用气-质联用(GC/MS)法,以尽可能完全的确定色谱中特征峰所代表的成份,并进行相似度比对,以此为制定切实可行的质量标准提供实验依据。在竹沥组分分析基础之上,进而从不同角度考察其药效功能,进一步完善竹沥药理学研究,填补其在药理学研究上的空白,并初步探索竹沥药效与化学组分之间的内在联系,找出竹沥发挥不同药效的活性成分,为竹沥制定生产质量标准、临床应用及竹沥新药开发提供可靠的研究基础和实验依据。 方法： 1.从外观性状角度鉴别竹子种类； 2.采用干馏炮制工艺制备竹沥； 以愈创木酚(Phenol,2-methoxy-)和苯酚(Phenol)作为外标物,采用GC/MS法分析研究竹沥化学成分；建立了竹沥的GC/MS指纹图谱。 4.采用小鼠氨水引咳诱喘法及酚红排泌法考察了淡竹沥、水竹沥以及干馏法、水提法、醇提法三种不同加工方法所制得竹沥的止咳化痰药效,以小鼠自发活动实验、协同戊巴比妥钠催眠实验、抗咖啡因致惊厥实验,考察了淡竹沥、水竹沥镇静、抗惊厥药效。 结果： 1.鉴定并采集了生长于湖南长沙的淡竹(Phyllostachys glauca McClure)、水竹(B.tuloidesMunro)、斑竹(Phyllostachys bambussoides cv.tanakae)、刺竹(B.blumeana Schult.f)4个竹子品种； 2.采用两种不同干馏时间的炮制工艺制备了4个竹子品种共八个批次的竹沥样品； 3.①以面积归一化法测得4种竹沥样品中各组分相对质量分数。根据质谱的棒图分析和NIST普库检索,分析定性了淡竹沥中可检测物质共101个,定性物质共42个,可定性物质占检测物质的41.58%；水竹沥中检测物质为100个,可定性物质为37个,可定性物质含量占检测物质含量的37%；斑竹沥中检测物质为105个,可定性物质为39个,可定性物质含量占检测物质含量的37.14%；刺竹沥中检测物质为153个,可定性物质为63个,可定性物质含量占检测物质含量的41.18%。②在对八个批次竹沥的GC/MS图谱对比结果中,有13个色谱峰为竹沥8个样品所共有,即100%共有,可以认为这13个组分为组成竹沥指纹图谱的基础组分,可作为控制竹沥质量的必要条件之一。其余的峰为部分样品所共有或特有,可作为辨别不同样品的特征峰。将所得各样品批次色谱图导入国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似性评价系统(2004A版),以13个特征峰相对峰面积为基本参数,对八批样品的GC图谱进行了相似度分析,结果显示各样品的相关系数和相合系数均大于80%,具有较高的相似性。 4.药理实验结果表明：①淡竹沥、水竹沥对小鼠氨水引咳实验的影响与空白组比较,咳嗽潜伏期明显延长,咳嗽次数明显减少,同对照组比较有显著差异(P<0.05),提示对小鼠氨水引咳有抑制作用,两种竹沥等剂量比较,淡竹沥对小鼠氨水引咳抑制作用更为明显,三种不同加工方法所制得淡竹沥之间相比较,醇提法所制得淡竹沥对小鼠氨水引咳抑制作用最为明显(P<0.05))；②淡竹沥、水竹沥与空白对照组比较,对小鼠气管酚红排泌有明显的促进作用,同对照组相比有显著差异(P<0.05)),结果表明淡竹沥、水竹沥具有显著的祛痰效果,两种竹沥等剂量比较,淡竹沥对小鼠气管酚红排泌促进作用更为明显,三种不同加工方法所制得淡竹沥之间相比较,醇提法所制得淡竹沥对小鼠气管酚红排泌促进作用更最为明显(P<0.05))；③淡竹沥、水竹沥与空白对照组比较,对小鼠抗咖啡因致小鼠惊厥作用明显,同对照组相比有显著差异,(P<0.05))结果表明淡竹沥、水竹沥能明显延长惊厥潜伏期、降低惊厥发生率,实验结果提示竹沥有较强的抗惊厥作用。两种竹沥等剂量比较,淡竹沥抗惊厥作用更为明显,三种不同加工方法所制得淡竹沥之间相比较,醇提法所制得淡竹沥抗咖啡因致小鼠惊厥作用最为明显；④淡竹沥、水竹沥与空白对照组比较,对小鼠自发活动抑制作用明显,同对照组相比有显著差异,结果表明淡竹沥、水竹沥能明显抑制小鼠自发活动,延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间,实验结果提示竹沥有较强的镇静安神作用,两种竹沥等剂量比较,淡竹沥镇静安神作用更为明显,三种不同加工方法所制得淡竹沥之间相比较,醇提法所制得淡竹沥对小鼠镇静安神作用最为明显(P<0.05))。 结论： 1.实验结果表明：四种竹沥中均含有文献报道具有祛痰止咳作用的活性成分为愈创术酚,其中淡竹与水竹相对含量较高,故在上述药效实验中,选取此二种竹沥进行试验。试验结果表明,淡竹止咳化痰药效强于水竹。结合GC/MS分析结果可看出,愈创木酚与苯酚实为竹沥镇咳化痰的主要活性成分。 2.经药效实验结果初步证明了竹沥具有止咳化痰、镇静、抗惊厥等功效,且醇提法所制备竹沥在上述药效上优于水提及传统炮制方法。 3. GC/MS分析结果提示：加热炮制时间对竹沥成分的比例和相对含量有较大影响,并由此结果可以推断,竹沥中以愈创木酚、苯酚为代表的低极性成分遇高温不稳定,容易分解或挥发,故竹沥活性成分含量与炮制加热时间成反比。