脾虚证大鼠心、肺、空肠组织PKC和心、肝、脑组织MAPK活性变化及补益脾胃方药作用机制的实验研究

随着时代的前进，中医现代化已经成为中医药学发展的主要方向，而证的实质的研究是中医迈向现代化的起点。现代科学认为，细胞是生物体的结构和功能的基本单位，生物细胞具有极其复杂的生命活动，这些生命活动都与生物信号分子所携带的信息在细胞内的传递有关。因此从中医证的细胞信号转导系统的变化规律入手来探讨中医证的实质，具有重要的意义。 脾在五行中属土，在五脏阴阳中属阴中之至阴。脾主运化，统血，升清，输布水谷精微，为气血生化之源、后天之本。脾虚证主要指脾气、脾阳或脾阴不足所呈现之各种证候，分为脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证。中国历代医家对脾的位置、形态、重量和生理功能进行了描述，并且对脾虚证的病因和病机进行了探讨。对脾虚证信号转导系统方面的研究已为学术界所关注。虽然近几年有一些脾虚证信号转导系统方面的研究报道，但是大多集中在信号转导的某一个孤立的环节上，并且其中以信号转导通路作为目的的研究非常少。 本项研究在已往研究的基础上，通过对脾虚动物心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织及空肠、脑组织蛋白激酶C(PKC)及分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)活性变化的研究，探讨脾虚状态下细胞信号转导的规律，进一步揭示脾虚的病理实质和健脾方药的作用机制，从而为脾实质的研究提供客观依据。 主要的研究内容包括： 1．观察了脾虚证大鼠心脏、肺脏及空肠组织的PKC活性及其部分亚型表达的变化。 采用底物磷酸化法和免疫印迹法，检测了脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证大鼠心脏、肺脏及空肠组织的细胞浆PKC、细胞膜PKC、细胞总PKC活性及细胞膜PKC／细胞总PKC的比值，同时观察了脾阳虚证大鼠上述三种组织PKCα、PKCβ-Ⅰ和PKCε三种亚型的表达。经统计学处理，比较脾虚证不同证候不同组织PKC活性。通过 摘要 观察探讨脾阳虚证不同组织PKC。、PKCp一I和PKC。三种亚型的表达的变化趋势。 2.观察了补益脾胃方药对脾虚证大鼠心脏、肺脏及空肠组织的PKC活性及其部 分亚型表达的影响 应用导师李德新教授拟定的补脾气、温脾阳和滋脾阴方药分别对脾气虚证、脾阳 虚证和脾阴虚证大鼠进行治疗，并观察其对心脏、肺脏和空肠组织PKC活性和亚型 表达的影响。 3.观察了脾虚证大鼠心脏、肝脏及脑组织的MAPK活性及MAP刀ERKI，2亚型 表达的变化。 采用免疫沉淀法和免疫印迹法，检测了脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证大鼠心脏、 肝脏及脑组织的MAPK活性及脾阳虚证、脾阴虚证大鼠ERKI和ERKZ两种亚型的 表达，同时观察了三种证候大鼠心脏及脑组织中此两种亚型的表达。经统计学处理， 比较脾虚证三种证候不同组织MAPK活性。通过观察探讨亚型表达的变化趋势。 4.观察了补益脾胃方药对脾虚证大鼠心脏、肝脏及脑组织的MAPK‘活性及 MAPK了ERK 1，2亚型表达的影响 5.观察了脾虚证大鼠心脏组织的PKC活性与MAPK活性变化的相互关系。 6.观察了补益脾胃方药对脾虚证大鼠心脏组织的PKC活性与MAPK活性变化相 互关系的影响。 研究结果表明:脾虚证大鼠各组织PKC和MAPK活性发生一系列改变，补脾方 药对其的影响亦很显著。具体如下: 1.各模型组不同组织PKC活性存在不同变化: (1)三种脾虚证模型中心脏组织的细胞浆PKC活性均明显升高，升高程度依次为: 脾阳虚证模型组>脾阴虚证模型组>脾气虚证模型组，其升高程度无显著性差异。脾 气虚证模型组和脾阴虚证模型组大鼠心脏组织的细胞膜PKC活性均显著升高，其中 脾阴虚证模型组升高程度有大于脾气虚证模型组的趋势。各模型组心脏组织的细胞总 PKC活性均明显升高，升高程度依次为:脾阴虚证模型组>脾气虚证模型组>脾阳虚 证模型组，升高程度无显著性差异。正常对照组细胞浆明显高于细胞膜，三种脾虚证 模型组细胞膜PKC活性与细胞浆PKC活性之间均无显著性差异。脾气虚证组和脾阴 虚证模型组PKCm用Kq的比值均显著升高。脾阴虚证模型组增高程度有大于脾气虚证 模型组的趋势。脾阳虚证模型组无明显变化。 (2)脾阳虚证模型组和脾阴虚证模型组肺脏组织的细胞浆PKC活性均显著降低。 脾阳虚证模型组降低程度有大于脾阴虚证模型组的趋势。脾阳虚证模型组和脾阴虚证 模型组细胞膜PKC活性均显著性升高，脾阳虚证模型组升高程度有大于脾阴虚证模 型组的趋势。脾气虚证模型组有升高趋势。三种脾虚模型组肺组织细胞总PKC活性 均有降低趋势。正常对照组细胞膜PKC活性显著低于细胞浆。脾阳虚证和脾阴虚证 大鼠细胞膜PKc活性均显著高于细胞浆。脾阳虚证和脾阴虚证PKcm/P Kct比值均显 一7一 摘要 著升高，脾阳虚证模型组升高程度有大于脾阴虚证模型组的趋势。 ③三种脾虚模型组空肠组织的细胞浆PKC活性均无改变。三种脾虚模型组细胞 膜PKC活性均显著升高。其中脾气虚证模型组升高程度有大于脾阴虚证模型组的趋 势，脾阴虚证模型组升高程度有大于脾阳虚证模型组的趋势，而脾气虚证模型组升高 程度显著大于脾阳虚证模型组。三种脾虚模型组空肠组织的细胞总PKC活性均明显 升高。其中脾气虚证模型组升高程度有大