桃红四物汤对鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制研究

帕金森病(Parkinson disease,PD)又称震颤麻痹,是锥体外系功能紊乱引起的一种慢性中枢神经系统退行性疾病,病理上主要表现为脑和(或)脊髓发生神经元退行性变性、脱失,并伴有神经细胞大量死亡。迄今为止,该病的发病机制尚未完全阐明。有研究表明氧化应激与PD密切相关。桃红四物汤(Taohongsiwu Decoction,THSWT)是活血化瘀、养血补血的代表方,在临床上有非常广泛的应用,常用于血瘀引起的多种病症。近年来研究发现,桃红四物汤及主要成分在抗氧化损伤、神经保护等方面能够发挥很好的效果。本实验利用鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型进行体外实验研究。待细胞贴壁达70-80%时,通过MTT法依次进行鱼藤酮损伤模型的建立、桃红四物汤及主要成分(羟基红花黄色素A、阿魏酸、苦杏仁苷、梓醇和芍药苷)安全浓度范围筛选和发挥保护作用时的浓度筛选;利用倒置显微镜观察细胞形态变化;通过Elisa实验比较细胞损伤前后α-synuclein寡聚体形成情况;通过JC-1线粒体膜电位检测评价药物干预前后线粒体膜电位的变化。此外,通过western blot实验比较给药干预前后Bax、bcl-2、ERK1/2、p-ERK、caspase-3、p53等氧化应激、细胞凋亡相关蛋白表达水平的变化,初步探讨桃红四物汤及其有效成分发挥神经保护作用的机制。结果显示,在安全剂量范围内,桃红四物汤及羟基红花黄色素A、梓醇和芍药苷等成分均可以提高鱼藤酮损伤的SH-SY5Y细胞活力(P<0.01),且呈剂量依赖性增加。倒置显微镜下观察到细胞变圆,突触短而少。在鱼藤酮诱导的PD模型中,α-synuclein寡聚体形成显著增多(P<0.001),而桃红四物汤可以抑制α-synuclein寡聚体形成(P<0.05)。桃红四物汤及羟基红花黄色素A、阿魏酸、苦杏仁苷、梓醇和芍药苷等可以逆转鱼藤酮导致的Δψ下降的现象。Western blot结果显示桃红四物汤、羟基红花黄色素A和芍药苷等能够下调Bax/Bcl-2、caspase-3、p53的表达水平,同时上调p-ERK/ERK,从而拮抗鱼藤酮引起的细胞凋亡。而阿魏酸和苦杏仁苷对p53、梓醇对p-ERK/ERK无明显逆转作用。综上所述,桃红四物汤在神经保护作用方面有积极作用。此外,体外实验还发现桃红四物汤中的主要成分羟基红花黄色素A、阿魏酸、苦杏仁苷、梓醇和芍药苷同样具有保护神经元的作用。这可能是氧化应激、线粒体功能、细胞凋亡共同作用的结果,可能由ERK通路介导发生(梓醇除外)。