基于EMT探讨乌梅丸煎剂对结肠炎相关性结直肠癌的预防作用

背景与目的:结肠炎相关性结直肠癌,严重的威胁人类的生命健康。乌梅丸是出自《伤寒论》的经典名方,对炎症性肠病有确切疗效,在此基础上,本实验旨在探讨乌梅丸煎剂对结肠炎相关性结直肠癌的预防作用及其可能潜在机制。方法:取C57雄性小鼠80只,随机分为空白组(10只)、模型组(20只)、阿司匹林阳性对照组(20只)、乌梅丸等效剂量组(15只)、乌梅丸高剂量组(15只)。空白组正常饲养,其他组复制AOM/DSS诱导的结肠炎相关性结直肠癌模型。于实验第5周初进行给药干预直至第15周末实验结束,模型组灌胃以等量生理盐水、阿司匹林阳性对照组灌胃以阿司匹林溶液、乌梅丸等效剂量组灌胃以等效剂量的乌梅丸煎剂,乌梅丸高剂量组灌胃以1.5倍的临床等效剂量的乌梅丸煎剂。记录小鼠一般状况、体重变化情况、疾病活动指数、小鼠的结直肠肿瘤数目、结直肠长度、结直肠质量/长度;运用ELISA检测血清IL-6的变化;通过Western Blot检测EMT相关蛋白表达情况。结果:1.乌梅丸煎剂可以改善模型小鼠的一般状况,提高小鼠的存活率。模型组小鼠出现明显的精神倦怠、饮食减少、毛发枯燥散乱等,体重出现明显降低,乌梅丸干预后,可以明显改善小鼠的上述症状,体重增加,但无统计学差异;模型组小鼠的存活率仅为35%(7/20),乌梅丸等效剂量组存活率80%(12/15),乌梅丸高剂量组存活率66.7%(10/15),由此可见,乌梅丸能明显提高小鼠的存活率,其中等效剂量的乌梅丸煎剂对提高小鼠的存活率效果更好,有统计学差异(P<0.0 1)。2.乌梅丸煎剂能降低小鼠造模后期的疾病活动指数第二次DSS自用饮用后,模型组的DAI为0.78±0.983,乌梅丸等效剂量组为0.619±0.853,乌梅丸高剂量组为0.641±0.756,乌梅丸组虽然好于模型组,但是无统计学意义;第三次DSS自由饮用后,模型组的DAI为3.43±0.38,乌梅丸等效剂量组为1.95±0.75,乌梅丸高剂量组为2.15±1.08,乌梅丸可以明显降低模型小鼠的DAI指数(P<0.01)。3.乌梅丸煎剂可以减少CAC小鼠的肿瘤数目及体积空白组小鼠肠道无肿瘤发生,与空白组比较,模型组小鼠肿瘤个数多(P<0.01),肿瘤直径大于等于3 mm的个数多(P<0.01);与模型组小鼠比较,乌梅丸治疗组肠道肿瘤个数及直径大于等于3 mm的肿瘤个数均减少,其中等效剂量组两者均明显减少(P<0.01),高剂量肿瘤总数减少(P<0.05),但是直径大于等于3 mm的肿瘤个数无统计学差异,治疗组间两者均未见统计学差异。4.乌梅丸煎剂可以增加CAC小鼠结直肠的长度,降低结直肠质量/长度与空白组比较,造模组小鼠结直肠长度明显缩短、结肠质量/长度明显升高,两者均有统计学差异(P<0.01)。与模型组小鼠比较,乌梅丸治疗组结直肠长度增加、结肠质量/长度降低,其中等效剂量和高剂量组小鼠结直肠长度均明显增加(P<0.01),等效剂量组小鼠结肠质量/长度明显降低(P<0.01)、高剂量组质量/长度亦降低(P<0.05)。5.乌梅丸煎剂可以降低小鼠血清中IL-6浓度与空白组比较,模型组小鼠血清IL-6的浓度明显升高,有统计学差异(P<0.01);经乌梅丸煎剂干预后,与模型组小鼠比较,乌梅丸等效剂量组与乌梅丸高剂量组小鼠血清IL-6的浓度明显下降,有统计学差异(P<0.01)。6.乌梅丸煎剂可以逆转CAC小鼠结直肠EMT相关蛋白的表达与空白组比较,模型组小鼠结直肠肿瘤组织的E-cad表达明显降低,有统计学差异(P<0.01);与模型组比较,乌梅丸等效剂量组、乌梅丸高剂量组小鼠结直肠肿瘤组织的E-cad表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠结直肠肿瘤组织的N-cad表达明显升高,有统计学差异(P<0.01);与模型组比较,乌梅丸等效剂量组、乌梅丸高剂量组小鼠结直肠肿瘤组织的N-cad表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠结直肠肿瘤组织的Vimentin表达明显升高,有统计学差异(P<0.01);与模型组比较,乌梅丸等效剂量组小鼠结直肠肿瘤组织的Vimentin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),但高剂量组无统计学差异。与空白组比较,模型组小鼠结直肠肿瘤组织的Snail表达明显升高,有统计学差异(P<0.01);与模型组比较,乌梅丸等效剂量组小鼠结直肠肿瘤组织的Snail表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),但高剂量组无统计学差异。结论:1.乌梅丸煎剂对AOM/DSS诱导的结肠炎相关性结直肠癌有很好的预防作用;2.乌梅丸煎剂预防结肠炎相关性结直肠癌的作用机制可能与降低血清中IL-6浓度、改善结直肠组织的EMT有关。