微囊藻毒素-LR通过PI3K/AKT信号通路促进黑色素瘤细胞侵袭和肿瘤转移

被引：0

作者：

许鹏飞

机构：

[1] 南京医科大学

关键词：

微囊藻毒素-LR; PI3-K/AKT; MMP-2/-9; 侵袭转移;

D O I：

暂无

年度学位：

2013

学位类型：

硕士

导师：

王婷;

摘要：

目的：微囊藻毒素MC-LR是蓝藻分泌的一种七环肽次级代谢产物,越来越多的证据表明,微囊藻毒素-LR可以促进人类肿瘤发生。而我们之前的研究已经证明微囊藻毒素-LR可以促进黑色素瘤细胞系MDA-MB-435的侵袭,但是进一步的分子机制并不是十分清楚。本研究旨在通过体外和体内实验证明微囊藻毒素-LR促进黑色素瘤细胞侵袭的分子机制。方法：1、Western blot方法检测不同浓度的微囊藻毒素-LR(0,5,12.5,25,50nM)处理黑色素瘤细胞系MDA-MB-435,pAKT/AKT蛋白表达变化以及负向调节PI3-K/AKT信号通路的PTEN蛋白表达情况。 2、进一步通过添加PI3-K/AKT抑制剂LY294002,荧光素酶报告基因方法检测LY294002是否逆转了MMP-2/-9的启动子活性；Western blot方法在蛋白水平检测微囊藻毒素-LR促进的MMP-2/-9的过表达是否被逆转；通过transwell方法检测微囊藻毒素-LR促进的肿瘤侵袭是否被逆转。 3、用siRNA干扰AKT表达,通过transwell实验检测微囊藻毒素-LR促进的肿瘤侵袭是否被逆转。 4、在裸鼠水平上通过皮下注射肿瘤细胞系MDA-MB-435后给予微囊藻毒素-LR灌胃处理(0,0.001,0.01,0.1mg/kg/d)。每周测量一次肿瘤大小和裸鼠体重。 5、通过免疫组织化学的方法检测MDA-MB-435肿瘤中MMP-2／-9以及PI3-K/AKT信号通路中较重要的蛋白pAKT的表达情况。 6、通过H&E染色检测裸鼠肺组织中MDA-MB-435肿瘤转移情况。结果：1、Western blot方法检测发现微囊藻毒素-LR浓度>25nnM时,显著促进了pAKT/AKT的表达；负向调节蛋白PTEN,在25nM微囊藻毒素-LR处理下表达量最低,而在50nM微囊藻毒素-LR反而升高。 2、我们进一步通过LY294002处理后,微囊藻毒素-LR促进的MMP-2/-9启动子活性以及蛋白过表达都被有效的逆转了；Transwell方法发现MDA-MB-435细胞侵袭能力也被逆转了。 3、AKT干扰后,微囊藻毒素-LR促进的MDA-MB-435细胞侵袭能力被逆转。 4、体内试验发现通过给予裸鼠微囊藻毒素-LR灌胃处理后肿瘤的体积和重量并没有明显的区别。 5、免疫组织化学方法检测发现微囊藻毒素-LR在0.01mg/kg/d浓度下有效的促进了MMP-2/--9的过表达,同时也促进了PI3-K/AKT信号通路中最重要的蛋白pAKT的表达。 6、H&E染色结果表明微囊藻毒素-LR处理后促进了裸鼠肺肿瘤结节数,说明微囊藻毒素-LR在体内促进了MDA-MB-435肿瘤的肺转移。结论：微囊藻毒素-LR通过PI3-K/AKT信号通路促进了MMP-2/-9的过表达进而促进了MDA-MB-435细胞侵袭转移,

引用

页数：69

共 36 条

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