健脾益气方调控NSAIDs胃粘膜损伤COX-2信号中CREB蛋白通路转导研究

研究目的： 本次实验研究目的：健中愈疡片在临床治疗中取得良好疗效,为广大患者解除病痛,尤其是对非甾体类抗炎药引起的急性胃黏膜损伤患者,缓解症状,减轻病痛。仅为进一步研究本制剂治疗非甾体类相关胃病的作用机制,为进一步临床应用及实验研究打下良好基础。 研究方法： 第一步：动物分组：将SPF级Wistar大鼠110只,雌雄各半,随机将110只大鼠分为6组,正常对照组10只,模型组、香砂养胃丸组、健中愈疡片高剂量组、健中愈疡片低剂量组分别为20只,西药组(奥美拉唑)20只。 第二步：动物造模及给药：正常组给予常规喂养,其余各组给予按照体重不同给予相对应的药物,治疗7天。7天后开始使用消炎痛造模,如西药组给予奥美拉唑,香砂养胃丸组给予香砂养胃丸,并在造模后7小时内将各组大鼠取一半(除正常组外),进行取胃观察,观察胃粘膜损伤情况,同时用试剂进行测试,其余大鼠同前喂养方式,坚持给药,待7天后再次取胃观察,检测胃粘膜物质。 第三步：采用免疫印迹(western blot)法,每组称取250mg胃黏膜组织提取蛋白质,取等量蛋白质,SDS-PAGE电泳,转至硝酸纤维素膜,封闭,分别加入Ⅰ抗(美国Santa Cruz Biotech生产)：COX-2多克隆抗体、兔抗鼠CREB多克隆抗体,洗膜,加入羊抗兔IgG-HRP,显示出特异性蛋白条带,用计算机图像分析系统测定灰度值,来判断蛋白相应含量。 研究结果： 1.一般情况观察结果 正常对照组、高剂量健中愈疡片组：大鼠精神如前,活动、反应正常,食欲食量未见明显改变,毛发光泽浓密,大便成形,未见软便、黑便。奥美拉唑组、香砂养胃丸组：大鼠精神稍差,食欲食量减退,活动、反应均较前减低,毛发失去光泽密度尚可,大便日2次,软便。模型组大鼠精神萎靡不振,反应迟钝,活动减少甚至懒动,食欲食量明显减少,毛发不同程度脱落且伴有光泽失去,大便2-4次／天,烂便或糊状便。 2.在造模后溃疡抑制百分率结果分别为： 西药组、香砂养胃丸组、高剂量健中愈疡片组、低剂量健中愈疡片组依次是：75.31%、44.43%、92.27%、65.50%。与模型组、西药组、香砂养胃丸组相比较具有统计学意义(P<0.05)。七天后溃疡抑制百分率结果分别为西药组、香砂养胃丸组、高剂量健中愈疡片组、低剂量健中愈疡片组依次是：83.38%、55.68%、96.43%、73.40%,与模型组、西药组、香砂养胃丸组相比较具有统计学意义(P<0.05)。 不同组中胃组织含胃黏膜CREB表达增加、COX-2表达较模型组低,正常组平均为(0.000±0.00),模型组平均为(3.903±0.18),西药组平均为(2.423±0.16),香砂养胃丸组平均为(3.492±0.18),健中愈疡片组高剂量平均为(2.336±0.12)健中愈疡片组低剂量平均为(2.723±0.12)。与正常组相比较,模型组和四个治疗组都具有显著差异(P<0.05)；中药组与西药组相比较,具有显著差异(P<0.05)；香砂养胃丸组相比较,具有显著差异(P<0.05)；健中愈疡片组高、低剂量组相比较,具有显著差异(P<0.05)。 结论： 健中愈疡片对非甾体类相关性胃病确有疗效。该中药方通过提高大鼠胃粘膜组织中环氧化酶和前列腺素的含量,促进胃粘液分泌,提高胃粘膜修复作用,降低炎性介质的释放,并可降低胃组织中胃黏膜CREB的含量,减少血管内物质活性对胃粘膜的损伤,促进微循环,,从两方面发挥保护和治疗胃粘膜组织的作用,体现了中医治疗疾病的优势。