背景：随着中医学对于癌症治疗的深入探索,中医药在提高肿瘤患者生存质量和延长生存时间等方面得到广泛的运用,中西医结合疗法在癌症治疗领域被众医家所肯定。近年来,许多临床及实验研究显示,姜类中药干姜、炮姜、姜黄、高良姜等在抑制肿瘤病的进展、减轻放化疗毒副作用等方面作用具有明显优势。
目的：本课题旨在研究姜类中药干姜、炮姜、姜黄、高良姜对胃癌SGC-7901细胞、肺癌A549细胞的体外抗癌作用以及对抗癌机制进行初探,为临床辨病辨证合理有效使用姜类中药提供一定实验及理论依据。
方法：采用MTT,3H-TdR掺入法观察姜类中药干姜、炮姜、姜黄、高良姜煎剂以及姜类中药含药血清对胃癌SGC-7901细胞、肺癌A549细胞的体外生长抑制作用。在体外抑瘤实验的基础上,采用Annexin V-FITC/PI双染法观察姜类中药血清诱导胃癌SGC-7901细胞、肺癌A549细胞凋亡作用,PI单染法观察姜类中药血清对肺癌A549细胞周期调节作用。
结果：(1)姜类中药煎剂(干姜、炮姜、姜黄、高良姜)对肺癌A549细胞均具有一定的增殖抑制作用,干姜、炮姜、姜黄的抑制作用随剂量的加大而逐渐增强,均具有显著统计学差异,提示它们对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性。(2)高良姜从10mg/ml到40mg/ml浓度对A549生长的抑制作用都接近100%,无明显浓度依赖性。(3)炮姜、高良姜在10mg/ml浓度下对A549抑制作用有统计学意义,其他药物在10mg/ml浓度下抑制率无统计学意义,姜黄在达到40mg/ml剂量后对A549的抑制作用有统计学意义。(4)四药中干姜的浓度依赖性最明显,随剂量上升,对A549细胞抑制作用加强明显并超过炮姜,有统计学意义。(5)姜类中药对A549的体外抑制作用强弱顺序为在10mg/ml浓度下：高良姜>炮姜>干姜>姜黄；在40mg/ml浓度下：高良姜>干姜>炮姜>姜黄。(6)姜类中药煎剂对胃癌SGC-7901细胞均具有一定的抑制增殖作用,干姜、炮姜、高良姜抑制作用随剂量的加大而逐渐增强,均具有显著统计学差异,提示它们对胃癌SGC-7901细胞具有增殖抑制作用,其抑制作用呈浓度依赖性。(7)姜黄对SGC-7901的抑制作用浓度依赖性无统计学意义。(8)高良姜在低浓度下(10mg/ml),对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用即迅速增强,到达平台期(大于90%)。(9)在本实验中,干姜、炮姜对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用：炮姜>干姜,且有统计学意义。(10)姜类中药对SGC-7901的体外抑制作用强弱顺序为：在20mg/ml浓度下高良姜>炮姜>姜黄>干姜,在40mg/ml浓度下高良姜>炮姜、干姜>姜黄。(11)姜类中药含药血清对肺癌A549细胞生有增殖抑制作用,其中以15%血清协同抑制作用最佳,此时抑制作用大小表现为炮姜>姜黄>高良姜>干姜。(12)姜类中药血清对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,其中以15%血清浓度协同抑制作用最佳,此时抑制作用表现为干姜>炮姜>高良姜>姜黄。(13)通过Annexin V-FITC/PI双染色法检测,姜类中药血清可诱导A549细胞凋亡,同时伴有细胞的坏死.干姜组诱导细胞凋亡作用最佳,其他各组差异不明显。(14)通过PI单染色法检测姜类中药血清干预肺癌A549细胞周期,各组药物血清显示出不同程度的G2/M期阻滞,其中以干姜组较高,炮姜组显示出一定程度G0/G1期阻滞。(15)通过Annexin V-FITC/PI双染色法检测胃癌SGC-7901细胞凋亡,姜类中药作用48h可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时伴有细胞的坏死.姜黄组诱导细胞凋亡作用最佳,其他各组差干姜>炮姜>高良姜。
结论：(1)姜类中药煎剂抑制肿瘤细胞体外生长实验显示：姜类中药(干姜、炮姜、姜黄、高良姜)均有抑制肺癌A549细胞、胃癌SGC-7901细胞增殖作用,对于不同细胞,其抑制作用强弱有不同特点。在10mg/ml浓度下,炮姜对于肺癌、胃癌细胞的抑制作用均大于干姜,干姜的抑制作用有明显的浓度依赖性,随浓度上升抑制作用显著增强,对于肺癌,在40mg/ml浓度下干姜优于炮姜。姜黄较其他实验药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用弱,在40mg/ml浓度下对于肿瘤细胞增殖抑制作用有显著统计学意义。高良姜在极小剂量(小于lOmg/ml浓度)时即对肺癌A549细胞、胃癌SGC-7901细胞的增殖即有抑制作用,并迅速上升到平台期(抑制率>90%)。(2)姜类中药血清抑制肿瘤细胞生长实验显示：姜类中药经体内代谢吸收后制备血清对细胞的抑制作用与生药制剂不完全相同。在本实验中,姜类中药血清总体评价以15%血清培养条件对肿瘤细胞增殖抑制作用最佳。(3)在15%血清培养条件下,相当于20g/日/人造模新西兰兔的姜类中药血清对肺癌细胞A549抑制作用：炮姜>姜黄>高良姜>干姜；对胃癌细胞SGC-7901抑制作用：干姜>炮姜>高良姜>姜黄。(4)在姜类中药血清诱导肿瘤细胞凋亡实验显示,姜类中药具有明显的诱导肺癌胃癌细胞凋亡作用。干姜对肺癌诱导凋亡作用大于其他药物,姜黄对胃癌诱导凋亡作用大于其他药物。姜类中药干预细胞周期实验显示,姜类中药抑制肿瘤细胞生长与姜类中药含药血清对肿瘤细胞周期G2/M期和G0/G1期阻滞有关。本实验为肯定姜类中药(干姜、炮姜、姜黄、高良姜)的抗癌作用提供了实验依据。提示姜类中药诱导肿瘤细胞凋亡及干预细胞增殖周期可能为抗癌作用机制。并对辨病辨证用药及药物剂量选择提供了思路。为中药细胞实验方法的选择提供了参考。
